肿瘤标志物在肿瘤的早期诊断、复发或转移的监测、疗效评价及预后评估中具有重要的意义。目前,针对肿瘤标志蛋白的检测方法主要是ELISA和免疫组化。这些方法都依赖于抗体去识别靶蛋白,虽然具有良好的特异性和灵敏性,但是抗体本身的一些局限性如结构复杂不易被修饰,不能被人工合成,价格昂贵易变性等限制了其在肿瘤标志蛋白检测中的进一步应用。近年来,噬菌体展示技术的发展对蛋白质分子相互识别的研究产生了深远的影响。借助于噬菌体展示肽库技术,许多能与蛋白质高亲和力结合的多肽被筛选出来,这些多肽结构简单明确,不仅可以对其进行目的性修饰,而且可以人工大量合成,一定程度上补充了抗体的不足。将多肽应用于新型生物传感器的构建是目前的研究热点,在本论文中,我们通过利用多肽与肿瘤标志蛋白的相互作用设计了两种检测肿瘤标志蛋白的新方法,这些方法对于肿瘤患者的临床管理具有一定的意义。1.黑色素瘤标志物S100B电化学检测新方法的研究黑色素瘤是一种高度恶性肿瘤,复发风险高,预后差,及时监测肿瘤的进展和复发对于黑色素瘤的临床管理十分必要。S100B不仅与黑色素瘤的负荷、疾病进展相关,而且可以预测患者的治疗效果和预后情况。本文构建了一种基于靶蛋白和多肽特异性结合的S100B检测新方法。研究表明,S100B能以1：2的方式结合2条特异性多肽,我们利用其中一条多肽识别S100B,另外一条则通过其氨基末端修饰的Gly-His-Lys (GHK)来产生信号。由于GHK可以络合铜离子,而铜离子可以催化邻苯二胺的氧化反应,生成具有电化学活性的二氨基吩嗪,因此,通过电化学方法的检测可实现基于催化反应的信号放大,从而提高本检测方法的灵敏性,检测下限达0.1 nM。我们对黑色素瘤患者的血标本也进行了分析,实验结果提示我们的方法具有潜在的临床应用价值。2.贝伐单抗疗效预测标志物VEGFR-1比色检测新方法的研究靶向抗肿瘤血管生成是肿瘤治疗策略非常重要的一部分,其代表药物是贝伐单抗。VEGFR-1是一个良好的贝伐单抗疗效预测标志物。因此,我们设计了一种基于多肽的VEGFR-1检测新方法。首先将VEGFR-1的特异性识别肽修饰在金纳米颗粒的表面,这条识别肽的氨基末端是色氨酸,由于八聚葫芦脲的疏水空腔能同时选择性容纳2个氨基末端的色氨酸,因此在VEGF R-1存在的情况下,多肽与、VEGFR-1结合,色氨酸的位点被VEGFR-1占据,此时八聚葫芦脲不能结合色氨酸,金纳米颗粒因此不能被聚集；然而,当检测体系中不存在VEGFR-1时,色氨酸的位点暴露,进而与八聚葫芦脲结合,金纳米颗粒因此被聚集。通过对金纳米颗粒的聚集状态进行紫外光谱分析以及颜色观察,即可实现蛋白质与多肽结合事件的信号转换。本方法检测下限为0.2 nM。我们在健康志愿者的血清中加入定量的VEGFR-1并对其进行检测,实验结果表明我们的方法具有潜在的临床应用前景。