紫杉醇是从红豆杉中提取出的具有高效抗肿瘤功能的天然药物,是目前临床一线化疗药物。紫杉醇水溶性差,临床应用中以聚氧乙烯蓖麻油和乙醇(V:V=1:1)为溶剂,而聚氧乙烯蓖麻油是导致临床用药出现过敏反应的主要原因,同时,它的体内代谢动力学参数不利于药物疗效的发挥。采用生物兼容性好的可生物降解的脂质纳米粒为载体,能够解决紫杉醇溶解性问题。研究表明:脂质体表面覆盖聚合物PEG可明显增强脂质体体内半衰期及其在肿瘤微血管的渗透,显著提高疗效。国内外已有报道,在脂质体表面连接适当的肿瘤细胞识别分子,如抗体、配体等,可以提高药物对肿瘤细胞的靶向性。叶酸是一个非常适合的配体,因为在多种肿瘤细胞的表面有过量的叶酸受体表达,通过以PEG为桥梁,间接连接叶酸与脂质体,必定可以提高药物靶向性,同时也能提高脂质体药物的血浆半衰期,从而提高肿瘤的治疗效果。目的:合成FA-PEG–DSPE复合物;构建新型叶酸靶向紫杉醇纳米脂质体(TAX-NLC-FA),并研究药物的理化性质及其对KB细胞的效应;为进一步研制新型抗肿瘤靶向药物提供实验依据。研究放射性同位素125I直接标记紫杉醇的方法,为开展新的纳米化紫杉醇制剂体内分布与代谢动力学的研究,提供合格的示踪剂。方法:采用室温酰化反应分步合成FA-PEG-DSPE,IR及1H-NMR等鉴定合成产物。采用高压乳匀法—冷乳匀法制备TAX-NLC-FA,激光粒度仪检测纳米粒的粒径及其分布。MTT细胞生长抑制试验观察TAX-NLC-FA对KB细胞的生长抑制作用。使用Ch-T、改良Ch-T、HNO3氧化法等三种方法,进行紫杉醇的125I标记,并通过纸层析、IR鉴定标记产物。结果:1.以DCC/NHS活化羧基方法合成FA-PEG-NH2方法简单,HPLC液相分离条件适合,FA-PEG-NH2与FA可以达到较好的分离,FA与FA-PEG-NH2保留时间(retention time ,RT)分别为2.368min、3.340min,产物连接比例30.63%±2.34%(n=10),产率16.7%±1.43%(n=10)。DSPE、SUC-DSPE的RT分别为1.997 min、1.663min,连接比率90.9%±1.03%(n=3),产率60.9%±2.17%(n=3)。终产物FA-PEG-DSPE以DCC活化羧基方法合成终产物,产率19%±1.06%(n=4)方法,磁共振氢谱证实,终产物为FA-PEG-DSPE。总体产率约为2%,产率低。2.新型TAX-NLC-FA的粒径分布134 nm±18nm(n=3),与非靶向紫杉醇纳米脂质体粒径(TAX-NLC)(66nm±6 nm)相比显著增加。3.通过MTT实验,新型TAX-NLC-FA对KB细胞的生长抑制作用明显增强,在作用24h后,新型TAX-NLC-FA对KB细胞24h的IC50为TAX-NLC 1/6倍左右。4 .对三种标记方法进行了比较,结果表明,改良Ch-T法标记率为63.1%±5.7%(n=5),放射化学纯度为96.3%±1.3%(n=5),储存于4℃生理盐水或乙醇储存体系24h、120h分别在95%以上、90%左右;在血浆中稳定性也较好,在4℃、37℃放置24h,放化纯分别为92.3%±0.4%、89.5%±0.6%。Ch-T法所得标记率为21.4%±3.3%(n=3),标记方法简单,但标记率低,无法得到稳定的标记产物。HNO3法标记率为72.6%±6.0%(n=6),标记率较高,产物相对较稳定,但实验当中采用80℃反应体系,不易操作及控制;由于温度高,过多的125I升华可能会造成更多的放射性污染及吸入,影响研究人员的身体健康,并降低放射性125I的利用率。改良Ch-T法标记紫杉醇是一个方法简便、标记率高、标记产物稳定性较好的方法,标记产物能够满足体内放射性示踪实验的要求。结论:采用室温酰化反应分步合成FA-PEG-DSPE,方法简单,但总体产率约为2%左右。产率低。新型TAX-NLC-FA粒径为134 nm±18nm(n=3),对KB细胞的生长抑制作用与TAX-NLC相比明显增强,24h的细胞毒性达到TAX-NLC的6倍左右。采用改良Ch-T法标记紫杉醇,标记方法简单、易操作,标记率达63.1%±5.7%,放化纯达96.3%±1.3%,纯化后的标记产物在血清、生理盐水和乙醇中有较好的稳定性,能满足体内药代动力学示踪实验的要求。通过本实验的研究,为进一步研制新型靶向性的纳米化紫杉醇,开展体内药物分布与代谢动力学的研究,奠定了良好的实验基础。