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目的：探讨表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂吉非替尼(Gefitinib)联合新型环氧合酶-2 (COX-2)抑制剂塞来昔布(Celecoxib)作用肺腺癌A549细胞后细胞的形态变化、凋亡率,以及EGFR、COX-2蛋白的表达及EGFR mRNA的表达情况,从而为肺癌的靶向治疗提供新的思路。方法：人肺腺癌A549细胞株以含10％胎牛血清的PRMI1640培养基于37℃、5％CO2培养箱培养。吉非替尼、塞来昔布分别用适量DMSO溶解,每次实验前用新鲜培养液配成相应工作浓度。药物作用实验分组如下：正常对照组、吉非替尼5μmol／L组、塞来昔布25μmol／L组、吉非替尼5μmol／L联合塞来昔布25μmol／L组均以RPMI 1640培养液配置浓度。药物干预细胞48h后,倒置相差显微镜观察不同作用组细胞形态学变化；四甲基偶氮唑盐(MTT法)检测药物对细胞生长的抑制作用；AnnexinV/PI法和Hoechst33258染色法检测细胞凋亡率；流式细胞术检测药物作用周期；免疫荧光和Realtime RT-PCR法检测EGFR、COX-2蛋白的表达及EGFR mRNA的表达情况。实验数据以(?)±s表示,用SPSS 11.5软件进行t检验、χ2检验和方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果：1、倒置相差显微镜下形态学观察①正常对照组：细胞紧密贴壁,边界清楚透明度高,生长旺盛,可见各期核分裂相。②吉非替尼单药组：细胞略变圆,形态改变,空泡和颗粒增多,细胞间隙增大。③塞来昔布单药组：细胞贴壁减慢,胞内出现空泡和颗粒。④联合用药组：相比单独用药组细胞明显皱缩变圆脱落,颗粒增多开始碎解,见细胞碎片和凋亡小体。2、四甲基偶氮唑盐(MTT法)检测药物对细胞生长的抑制作用药物作用48 h后,单药吉非替尼和塞来昔布对细胞的抑制作用具有时间、剂量依赖性。加药48 h,单药吉非替尼(5μmol／L)、塞来昔布(25μmol／L)细胞抑制率依次为(24.8±2.1)％、(21.5±1.7)％,吉非替尼(5μmol／L)联合塞来昔布(25μmol／L)组抑制率为(58.2±4.6)％,明显高于单药组(P<0.01)。3、药物联合治疗后的凋亡效应AnnexinV/PI法结果显示：正常对照组早期凋亡率为0.66％,5μmol／L吉非替尼联合25μmol／塞来昔布处理细胞48 h后,可见33.9％的细胞凋亡,明显高于5μmol／L吉非替尼、25μmol／塞来昔布单独作用的细胞凋亡率(6.00％和8.85％)。Hoechst33258染色法：正常细胞核染色均匀,形状规则,凋亡细胞核呈现核固缩浓染,核分叶呈月牙状或蚕豆状,碎裂呈米粒状。48 h后联合用药组凋亡率高达32.4％,远高于单药吉非替尼组(7.12％)和塞来昔布组(8.43％)4、药物对细胞周期的影响吉非替尼、塞来昔布均引起G0～G1期阻滞。与单药组相比,联合用药组S期细胞比例明显减少(P<0.01),G0／G1期细胞比例明显增加(P<0.01)。5、免疫荧光法检测药物对细胞EGFR和COX-2蛋白的影响EGFR和COX-2在正常对照组荧光很强,可见在正常A549细胞中两者均高表达。联合用药组EGFR和COX-2荧光强度均很弱,与单药组相比差别具有统计学意义(P<0.05)。6、Realtime RT-PCR法检测药物对细胞EGFR mRNA表达的影响加入终浓度为5μmol／L的吉非替尼作用48 h后,A549细胞EGFR mRNA的相对表达量为(0.45+0.07)；25μmol／L塞来昔布组A549细胞EGFR mRNA的相对表达量为(0.59+0.11),加药组与正常对照组相比差异显著(P<0.01)。联合用药组A549细胞EGFRmRNA的相对表达量为(0.28+0.05),明显低于单独用药吉非替尼组(P<0.05)和单独用药塞来昔布组(P<0.01)。结论吉非替尼和塞来昔布联合具有协同作用,可能机制是促进凋亡、增强G0／G1期阻滞和进一步下调活化的EGFR与COX-2的表达。