论文部分内容阅读
研究背景及目的:癫痫是神经系统常见疾病之一,癫痫患者中75%通过常规的一线抗癫痫药物治疗可获得满意疗效,约25%的癫痫即使科学正规地应用常规抗癫痫药物,发作仍难以控制而成为难治性癫痫(Intractable Epilepsy,IE)。颞叶癫痫(Temporal Lobe Epilepsy,TLE)是常见的难治性癫痫之一,占难治性癫痫的50%以上。所以以颞叶癫痫为切入点,研究新的有效的治疗难治性癫痫的途径和方法有很重要的意义。临床实践中发现,中医药在治疗癫痫尤其是难治性癫痫方面有较好改善症状,控制发作的特色和疗效优势。目前癫痫的中医药临床研究存在标准混乱、证型不统一、证候描述不一致、评价指标不合理、评价方法不科学等问题,因此制定一个新的、符合临床要求的中医癫痫病证诊治标准成为必要,而证候研究是中医癫痫诊治标准化的核心。但是目前关于颞叶癫痫的中医证候研究尚未见到。本课题作为癫痫中医研究的起步工作,初步总结颞叶癫痫的中医证候分布,为癫痫的证候规范化、客观化及中医药治疗癫痫诊疗标准的建立奠定基础。同时通过动物实验探讨中药复方柴贝止痫汤干预癫痫发作的机理,以期为中医药治疗癫痫提供理论依据。方法:临床研究通过文献调研和专家咨询制定颞叶癫痫临床证候调查表,采用横断面调查的研究方法,收集北京中医药大学东方医院及首都医科大学附属北京天坛医院的102例颞叶癫痫患者中医四诊信息等相关资料,并采用因子分析的方法对颞叶癫痫中医证候分布作出初步的归纳总结。实验研究第一部分:建立匹罗卡品癫痫持续状态后颞叶癫痫模型,以中药、西药干预,观察大鼠机体状态、癫痫发作的次数、每次发作持续时间、平均持续时间、癫痫发作级别及进行体重检测,判定、分析药物的疗效。采用HE染色和尼氏染色,光学显微镜下,对颞叶癫痫模型大鼠脑组织海马和颞叶皮层进行病理形态学观察。第二部分:采用免疫组化和Western-blot的方法,检测癫痫大鼠脑组织γ-氨基丁酸A受体α1亚单位(GABA_ARα1)和NMDA受体NR1亚单位(NMDAR1)的表达。观察癫痫模型大鼠脑组织海马和颞叶皮层GABA_ARα1和NMDAR1的表达和分布,探讨中药复方柴贝止痫汤对癫痫大鼠脑组织GABA_ARα1和NMDAR1表达的影响及其治疗癫痫的机理。结果:临床研究运用因子分析的方法得到5个颞叶癫痫的中医临床证候分类:风痰内阻兼郁证、痰火内闭证、心脾两虚证、瘀阻脑络证、肝肾阴虚证。其中风痰内阻兼郁证为颞叶癫痫发作间期的主要证型,其次是痰火内闭证、心脾两虚证、瘀阻脑络证和肝肾阴虚证。性别、病程及发作频率在证候分布上没有显著性差异(P＞0.05),而年龄及发病年龄在证候分布上有显著差异(P＜0.05)。实验研究第一部分实验结果1各致痫组大鼠发作总次数、总持续时间变化与空白模型组比较,柴贝止痫汤联合卡马西平组、柴贝止痫汤组、卡马西平组的发作总次数减少,有显著性差异(P＜0.05);与柴贝止痫汤联合卡马西平组比较,柴贝止痫汤组的发作总次数增加,有显著性差异(P＜0.05)。与空白模型组比较,柴贝止痫汤联合卡马西平组发作总时间减少,有显著性差异(P＜0.05);与柴贝止痫汤联合卡马西平组比较,柴贝止痫汤组、卡马西平组发作总时间增加,均有显著性差异(P＜0.05)。2各致痫组大鼠治疗前后发作平均持续时间的变化:治疗后,与空白模型组比较,柴贝止痫汤联合卡马西平组、柴贝止痫汤组、卡马西平组发作平均持续时间减少,有显著性差异(P＜0.05);与柴贝止痫汤联合卡马西平组比较,柴贝止痫汤组发作平均持续时间增加,有显著性差异(P＜0.05)。与治疗前比较,柴贝止痫汤联合卡马西平组发作平均持续时间减少,有高度显著性差异(P＜0.01);柴贝止痫汤组、卡马西平组发作平均持续时间均减少,有显著性差异(P＜0.05)。3各致痫组大鼠治疗前后癫痫发作级别的变化:治疗后,与空白模型组比较,柴贝止痫汤联合卡马西平组、卡马西平组癫痫发作级别有明显降低,有显著性差异(P＜0.05)。与治疗前比较,柴贝止痫汤联合卡马西平组癫痫发作级别明显降低,有高度显著性差异(P＜0.01);卡马西平组癫痫发作级别降低,有显著性差异(P＜0.05)。4各组大鼠体重变化比较:治疗前,与正常组大鼠比较,空白模型组、柴贝止痫汤联合卡马西平组、柴贝止痫汤组、卡马西平组体重均减轻,有显著性差异(P＜0.05)。治疗后,与正常组大鼠比较,空白模型组、柴贝止痫汤联合卡马西平组、柴贝止痫汤组、卡马西平组体重均减轻,有显著性差异(P＜0.05);与空白模型组比较,柴贝止痫汤联合卡马西平组体重增加,有显著性差异(P＜0.05)。与治疗前比较,各组大鼠体重均有增加,有显著性差异(P＜0.05)。5病理形态学观察结果氯化锂—匹罗卡品颞叶癫痫大鼠模型脑组织海马CA1区、CA2区、CA3区、齿状回和颞叶皮层神经元出现明显损伤,其病变以海马CA1区、CA3区最明显,其次为CA2区、齿状回、颞叶皮层。中药复方柴贝止痫汤、卡马西平能够在一定程度上减轻癫痫大鼠脑组织海马CA1区、CA2区、CA3区、齿状回和颞叶皮层神经元的损伤,提示二者神经元保护作用的存在。第二部分实验结果采用免疫组化和Western-blot的方法检测GABA_ARα1和NMDAR1的表达结果相一致。1 GABA_ARα1的表达与空白模型组比较,柴贝止痫汤组、柴贝止痫汤联合卡马西平组癫痫大鼠海马CA1、CA3区及颞叶皮层的GABA_ARα1亚单位表达均明显增强,有高度显著性差异(P＜0.01),但柴贝止痫汤组与柴贝止痫汤联合卡马西平组之间无显著性差异(P＞0.05)。与正常组比较,空白模型组和卡马西平组癫痫大鼠海马CA1、CA3区及颞叶皮层的GABA_ARα1表达均明显减少,有高度显著性差异(P＜0.01)。2 NMDAR1的表达与正常组比较,柴贝止痫汤组、中柴贝止痫汤联合卡马西平组、卡马西平组、空白模型组海马CA1、CA3区及颞叶皮层的NMDAR1表达均明显增高,有显著性差异(P＜0.05),但柴贝止痫汤组、中柴贝止痫汤联合卡马西平组、卡马西平组、空白模型组各组之间无显著性差异(P＞0.05)。结论:临床研究颞叶癫痫的主要证候包括风痰内阻兼郁证、痰火内闭证、心脾两虚证、瘀阻脑络证和肝肾阴虚证。其中风痰内阻兼郁证为颞叶癫痫发作间期的主要证型,其次是痰火内闭证、心脾两虚证、瘀阻脑络证和肝肾阴虚证。颞叶癫痫的证候与性别、病程和发作频率无明显关系,而与年龄及发病年龄有一定关系,并且青中年以风痰内阻兼郁证及痰火内闭证为著,而中老年人以肝肾阴虚证突出。实验研究氯化锂—匹罗卡品颞叶癫痫模型操作简单、成功率高、稳定性好。中药柴贝止痫汤对癫痫发作有一定的抑制作用,柴贝止痫汤联合卡马西平的治疗方法对于癫痫的行为学改变优于单独应用卡马西平及柴贝止痫汤。柴贝止痫汤可以提高GABA_ARα1的表达,而对NMDAR1无明显影响。对GABA_ARα1表达的调节是柴贝止痫汤控制癫痫的可能机理之一。