论文部分内容阅读
背景:随着新辅助化疗在临床治疗中的广泛应用,宫颈癌患者的总体生存率有所提高,但传统化疗药具有一系列的毒副作用,寻求新的安全有效的化疗药物成为当今研究的热点,中药以其副反应小为特点,近年来国内外研究表明大蒜素可增强化疗药的抗肿瘤作用,并能减低化疗药的副反应,但对其作用机制尚未明确。目的:本实验通过研究大蒜素联合奥沙利铂对人宫颈癌细胞株Hela增殖和凋亡的影响,探讨大蒜素可否增强奥沙利铂对肿瘤细胞的杀伤作用;进一步探讨大蒜素与奥沙利铂联合应用的作用机制,为临床应用提供理论依据。方法:采用细胞培养技术进行人宫颈癌细胞株Hela细胞的培养,不同浓度大蒜素、奥沙利铂及两者联合作用于人宫颈癌Hela细胞后,用CCK法检测肿瘤细胞增殖抑制率;通过原位末端标记技术法(TUNEL)和AnnexinV-TITC/PI双染法流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞的凋亡率;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测凋亡相关基因bcl-2、bax和caspase-3 mRNA的表达。结果:CCK法发现奥沙利铂在4~64μmol/L浓度范围内在体外对Hela细胞的生长增殖有明显的抑制作用,且呈时间剂量依赖性,24h、48h和72hIC50分别为62.4μmol/L、30.2μmol/L和18.6μmol/L,联合大蒜素后抑制作用增强(p<0.05),24h、48h和72hIC50值分别由原来降至40.6μmol/L、18.7μmol/L和10.8μmol/L,细胞杀伤率分别提高1.60、1.61和1.72倍;流式细胞术显示IC50(48h)奥沙利铂作用Hela细胞48小时可以诱导部分Hela细胞凋亡,细胞凋亡率为22.7+3.4%,联合大蒜素后凋亡率增加(p<0.05),为50.5+5.7%。RT-PCR法检测结果显示大蒜素联合奥沙利铂作用Hela细胞后凋亡相关基因bcl-2mRNA表达水平下调,而bax和caspase-3 mRNA的表达水平上调,与对照组相比有显著性差异(p<0.05)。结论:奥沙利铂可使Hela细胞生长受到明显的抑制;与大蒜素联合应用可增强其对肿瘤细胞的细胞毒活性,减少化疗药的用量,增强化疗敏感性,两者有协同抗肿瘤作用;其诱导Hela细胞凋亡的机制可能与下调bcl-2 mRNA和上调bax和caspase-3 mRNA有关。