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第一部分巨噬细胞浸润对角膜新生血管影响的实验研究目的用角膜缝线法诱导大鼠角膜新生血管（corneal neovascularization,CNV）和角膜新生淋巴管（corneal lymphangiogenesis,CL）模型,探究巨噬细胞浸润对大鼠CNV的影响。方法将实验动物分为空白脂质体组（Group1）、巨噬细胞清除剂组（Group2）、巨噬细胞清除剂+巨噬细胞组（Group3）三个组。Group1组大鼠分别在第1、4、8天于双眼结膜下注射10ul空白脂质体作为对照,Group2组大鼠分别在第1、4、8天于双眼结膜下注射10ul巨噬细胞清除剂（Clodronate Liposomes）,Group3组大鼠在第1、4天于双眼结膜下注射10ul Clodronate Liposomes,在第8天于双眼结膜下注射10ul巨噬细胞（4×10~4个）。所有大鼠均于第2天在双眼角膜距角膜缘1.5mm处行角膜缝线操作。各组大鼠于第7、14天进行:1)临床观察,裂隙灯拍照评估各组大鼠CNV生长情况及眼表炎症反应程度;2)角膜组织苏木精-伊红（HE）染色,光学显微镜下观察各组大鼠角膜结构的变化;3)角膜组织CD68和CD31免疫荧光染色,荧光显微镜下观察各组大鼠角膜巨噬细胞浸润和CNV生长情况。结果1)临床观察:第7天,三组大鼠的CNV面积占整个角膜的面积比分别为74.86±3.74%、57.00±2.85%、64.00±3.20%,Group1的CNV面积占比高于Group2和Group3（Group2:P=0.0026,Group3:P=0.0318）;Group2和Group3之间CNV面积占比差异无统计学意义（P=0.0674）。第14天,三组大鼠的CNV面积占比分别为:84.00±4.18%、62.51±3.12%、81.31±4.06%,Group1和Group3的CNV面积占比均高于Group2（Group1:P=0.0047,Group3:P=0.0035）。2)HE染色结果示:第7天,相比于Group1,Group2和Group3的角膜基质胶原排列更紧密,CNV和炎性细胞浸润都较少。第14天,Group1的CNV和炎性细胞浸润依旧多于Group2;而且Group3的CNV和炎性细胞浸润也增多,多于Group2。3)角膜组织CD68和CD31免疫荧光染色结果示:第7天,各组的CD68阳性细胞计数分别为:12.83±4.40、1.33±1.40、1.03±0.86,Group1多于Group2和Group3（Group2:P=0.0243,Group3:P=0.0204）;而Group2和Group3之间差异无统计学意义（P=0.8078）。第14天,各组CD68阳性细胞计数分别为9.69±2.39、1.87±1.12、14.46±4.86,Group1和Group3均多于Group2（Group1:P=0.0021,Group3:P=0.0047）。CD31荧光染色表现出相似的趋势,第7天,Group1的CD31阳性区域多于Group2和Group3,Group2和Group3之间差异不明显;第14天,Group1和Group3的CD31阳性区域均多于Group2。结论巨噬细胞浸润可促进缝线诱导的CNV的生长。第二部分角膜胶原交联对CNV和CL的影响及其机制的实验研究目的用角膜缝线法诱导大鼠CNV和CL模型,探究核黄素紫外线角膜胶原交联（corneal collagen cross-linking,CXL）对CNV和CL的作用及其机制。方法将实验动物分为三组,CNV组、CXL组、CXL+collagenase组。CNV组:用缝线法构建大鼠CNV模型,且在缝线后去除直径5mm范围的中央角膜上皮;CXL组:对大鼠角膜进行缝线,并去除中央角膜上皮,用浓度为0.22%的核黄素点双眼,每3min滴一次,30min后进行CXL（9m W/cm~2,240s）;CXL+collagenase组:对大鼠角膜进行缝线,去除中央角膜上皮,用浓度为0.22%的核黄素点双眼,每3min滴一次,30min后进行CXL（9m W/cm~2,240s）,随后双眼滴5mg/ml胶原酶II,5min一滴,30min后生理盐水冲洗双眼。各组大鼠于第4、7、10、14天进行:1)临床观察,裂隙灯拍照评估各组大鼠CNV生长情况及眼表炎症反应程度;2)角膜组织HE染色,光学显微镜下观察各组大鼠角膜结构的变化;3)角膜组织CD68和CD31免疫荧光染色,荧光显微镜下观察各组大鼠角膜巨噬细胞浸润和CNV生长情况;4)Real-time PCR检测CD31、LYVE-1、CD68、i NOS、Arg-1的m RNA表达量,从m RNA水平分析各组大鼠CNV、CL、角膜巨噬细胞浸润、M1和M2型巨噬细胞极化的变化情况。结果1)裂隙灯下观察,第4天,CXL和CXL+collagenase组CNV面积占比均多于CNV组,但无统计学意义（CXL组:P=0.1292,CXL+collagenase组:P=0.1316）;第7、10、14天,CNV组和CXL+collagenase组CNV面积占比均高于CXL组（在三个时间点,CNV组P值分别为0.0341,0.0340和0.1004,CXL+collagenase组P值分别为0.1648,0.0044和0.0188）。2)HE染色结果示,第4天,CNV组角膜基质胶原排列整齐紧密,与CNV组相比,CXL组和CXL+collagenase组角膜基质胶原空隙增大,有较多的新生血管和炎性细胞浸润;第7、10天,CNV组和CXL+collagenase组CNV和炎性细胞浸润都较CXL组多;第14天,CNV组炎性细胞浸润较之前减少,但CNV组和CXL+collagenase组的CNV和炎性细胞浸润仍多于CXL组。3)免疫荧光染色CD68阳性细胞计数结果示,第4天,CXL组和CXL+collagenase组多于CNV组,但差异无统计学意义（CXL组:P=0.0794,CXL+collagenase组:P=0.0971）;第7、10天,CNV组和CXL+collagenase组均多于CXL组（在两个时间点,CNV组P值分别为0.0100和0.0064,CXL+collagenase组P值分别为0.0010和0.0040）;第14天,CNV组多于CXL组（P=0.0337）,CNV+collagenase组也表现出多于CXL组的趋势（P=0.1254）。4)CD31免疫荧光染色结果示,第4天,相对于CNV组,CXL组和CXL+collagenase组CNV较多;第7、10天,CNV组和CXL+collagenase组CNV均多于CXL组;第14天,CNV组仍可见CNV,CXL和CXL+collagenase组几乎无CNV。5)Real-time PCR结果示,第4天,CXL组的CD31、LYVE-1和CD68的m RNA相对表达量均高于CNV组。实验第7、10和14天,虽然部分比较无统计学意义,但CNV组和CXL+collagenase组的CD31、LYVE-1、CD68的m RNA相对表达量均表现出高于CXL组的趋势。CXL组i NOS和Arg-1的m RNA相对表达量的比值在实验第4、7、10和14天均高于其它两组。结论CXL可通过抑制巨噬细胞浸润抑制CNV和CL的生长,并且通过CXL增加角膜基质硬度以促进巨噬细胞向M1型极化可能为CXL抑制CNV和CL的机制之一。