两株植物内生菌对油菜菌核病的防治研究

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油菜菌核病是由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary)引起的世界性病害,在我国各个油菜主产区均普遍发生,一般年份发病率为1030%,严重年份或严重地块的发病率达80%以上,对油菜的产量和品质都造成了严重的影响。由于目前油菜缺乏有效的抗病品种,农业防治和化学防治仍是生产上主要的防治措施,比如水旱轮作、摘除老病黄叶、喷施多菌灵、腐霉利等化学药剂等。然而,由于油菜的栽培措施、农村劳动力的减少等原因,农业防治的可行性很低。化学药剂的大量使用造成了严重的环境污染,并且导致病原菌抗药性的产生。因此寻找环境友好型的生防菌株,研究其合理的运用方法成为目前菌核病防治的热点。本实验室前期从各种植物中分离到大量植物内生菌,并从中筛选获得了一批对油菜菌核病具有抑制作用的菌株,其中有两株内生菌可以强烈抑制油菜菌核病菌菌丝生长和菌核萌发。本研究进一步对这两株植物内生菌的温室防效、田间防治效果、抑菌机理、使用剂型的研制等方面进行了探索,得到以下结果:1.通过皿内抑菌活性试验发现植物内生细菌EDR4和内生放线菌Hhs.015T可以显著抑制菌丝生长和菌核萌发。温室盆栽试验表明将两株植物内生菌的发酵上清液和菌悬液喷施在油菜苗期叶片和茎秆上能够显著降低病害发生。于接种的同时喷施生防菌发酵液的防治效果最好,防治效果最高可达90%以上,接种前1d喷施生防菌发酵液的防治效果次之。生防菌发酵上清液和菌悬液的防治效果之间不存在显著性差异。2.安全性检测试验表明两株植物内生菌不影响寄主种子的萌发,注射后不影响叶片生长,对寄主植物和环境没有危害。田间试验明确了植物内生放线菌的喷施时期,调查结果发现于油菜初花期和盛花期各喷施一次内生放线菌Hhs.015T发酵液的防治效果最好,于初花期喷施一次内生细菌EDR4发酵液即可达到良好的防治效果。随着稀释倍数的增加,生防菌发酵液的防治效果逐步降低。3.利用电镜技术观察生防菌液对菌丝生长和入侵情况的影响,发现生防菌液能够引起油菜菌核病菌菌丝畸形、皱缩、原生质外渗等现象。菌丝细胞严重液泡化、细胞器紊乱、小菌丝大量产生并且小菌丝细胞同样出现液泡化等现象。在喷施生防菌发酵液以后,能够在叶片形成保护膜,严重抑制菌丝在叶片的生长和扩展,侵染垫的形成数量减少、形成时间推迟。同时菌丝也出现畸形、原生质体外渗等情况。4.利用植物内生细菌EDR4开发的生防制剂在室温条件下储存11周后,活菌含量仍可达到108CFU g-1,稀释100倍后仍可显著抑制菌丝的生长。在温室盆栽试验中发现制剂样品稀释50倍后与EDR4发酵原液的防治效果相当,田间试验结果表明初花期和盛花期各喷施一次的防治效果最好。
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