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目的:以骨桥蛋白为切入点,通过动物实验探讨中医补肾健脾方药健骨颗粒对去卵巢大鼠骨吸收的影响,以进一步明确其防治绝经后骨质疏松症的作用机制。方法:1.动物分组、造模、灌胃及取材:81只3月龄清洁级雌性SD大鼠,随机分为2组:假手术组27只、卵巢切除组54只。卵巢切除组大鼠行双侧卵巢摘除术,假手术组除未行双侧卵巢结扎切除外,其余同卵巢摘除组。术后卵巢摘除组再随机平均分为生理盐水组和健骨颗粒组。术后第三天开始灌胃,假手术组和生理盐水组每天灌服生理盐水2ml/只,健骨颗粒组每天给予健骨颗粒原生药5.8g/kg/d,以2ml/只生理盐水溶解颗粒后灌服,每天一次。连续灌胃4周、8周、12周后,分3批取材,每次随机选择9只。取材前一天收集24小时尿液,离心去除沉淀,-80℃冻存,用于尿DPD及尿Cr的检测;腹主动脉取全血,离心后取血清,-80℃分装冻存,用于血清TRACP-5b的检测;分离左侧股骨,用于检测骨生物力学;分离第三至第五腰椎,用于骨密度检测;分离第一、第二腰椎,用于OPN、Itgαv和Itgβ3mRNA及蛋白测定。2.指标检测:应用Discovery Wi双能X线骨密度仪测定腰椎骨密度;应用IG-A1000N万能材料试验机测定左股骨的最大载荷力;采用ELISA法检测血清TRACP-5b含量;ELISA法检测尿液DPD含量;生化法检测尿液Cr含量;采用实时荧光定量PCR检测骨组织OPN、Itgαv和Itgβ3mRNA含量;采用Western Blot法检测骨组织OPN、Itgαv和Itgβ3蛋白的表达。结果:1.骨密度测定:4周、8周、12周腰椎骨密度指标检测显示,同期生理盐水组和健骨颗粒组BMD值均低于假手术组;生理盐水组与假手术组在8周、12周时具有显著性差异(P<0.01);同期健骨颗粒组均高于生理盐水组,在4周时两者的差异不明显(P>0.05),在8周、12周时具有显著性差异(P<0.01)。2.骨骼生物力学测定:4周、8周、12周大鼠股骨骨骼生物力学检测显示,同期生理盐水组和健骨颗粒组骨骼最大载荷力均低于假手术组;生理盐水组与假手术组比较具有显著性差异(P<0.01);同期健骨颗粒组均高于生理盐水组,在4周两者的差异不明显(P>0.05),在8周、12周具有显著性差异(P<0.01)。3.血清TRACP-5b测定:4周、8周、12周大鼠血清TRACP-5b含量检测显示,同期生理盐水组和健骨颗粒组TRACP-5b含量均高于假手术组;生理盐水组与假手术组比较具有显著性差异(P<0.01);同期健骨颗粒组均低于生理盐水组,且具有显著性差异(P<0.01)。4.尿DPD/Cr比值:4周、8周、12周大鼠尿DPD/Cr比值结果显示,同期生理盐水组和健骨颗粒组尿DPD/Cr比值均高于假手术组;生理盐水组与假手术组比较具有显著性差异(P<0.01);同期健骨颗粒组均低于生理盐水组,在4周两者的差异不明显(P>0.05),在8周具有显著性差异(P<0.01),在12周时差异有统计学意义(P<0.05)。5.骨组织OPN、Itgαv和Itgβ3mRNA表达:4周、8周、12周大鼠腰椎组织OPN、1tgαv和Itgβ3的荧光定量PCR检测显示,同期生理盐水组和健骨颗粒组三个指标mRNA含量均高于假手术组,且具有显著性差异(P<0.01);同期健骨颗粒组均低于生理盐水组,在8周、12周时具有显著性差异(P<0.01)。6.骨组织OPN、Itgαv和Itgβ3蛋白表达:4周、8周、12周大鼠腰椎组织OPN、Itgαv和Itgβ3的蛋白印迹实验检测显示,同期生理盐水组和健骨颗粒组三个指标蛋白含量均高于假手术组,且具有显著性差异(P<0.01);同期健骨颗粒组均低于生理盐水组,在8周、12周时具有显著性差异(P<0.01)。结论:1.卵巢切除后,上调了骨组织中OPN、Itgαv和Itgβ3mRNA及蛋白表达,提升了破骨细胞的功能活性,进而导致了 PMOP的发生;2.健骨颗粒能下调骨组织中OPN、Itgαv和Itgβ3mRNA及蛋白表达,抑制了破骨细胞的功能活性,有效缓解卵巢切除后的骨吸收。