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烷基苯酚(APs)是一类环境内分泌激素,具有生殖、免疫和神经等多种生物毒性,对水生动物、两栖类和哺乳类动物的性别分化和生殖产生较大危害,同时对人类的健康具有潜在危害。由于烷基苯酚的毒性较大、污染范围较广,各国纷纷出台相关法律法规限制烷基苯酚的使用,故高亲和力的APs单抗的制备对其含量的检测显得尤为重要。APs是一个结构相似的大家族,具有共同的苯酚结构和不同长度的碳链。本文以戊基苯酚为研究对象,通过碳二亚胺法与BSA和OVA偶联制备完全抗原,计算得到耦合率分别为39:1和41:1。三次免疫后,测得血清效价皆高于128 000,通过电融合法将其脾脏细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,ELISA和流式细胞仪分筛得到四株单克隆抗体细胞株,选取IC50分别为9.8 μg/mL和185 ng/mL的F10和戊-13两株抗体用于后续研究。分型试剂盒测得F10和戊-13的重链分别为IgG1型和IgM型,轻链都为Kappa型;两株抗体都对烷基苯酚具有不同程度的识别,对APA和AP的识别较好。同源建模实验表明两株抗体的可变区重链和轻链分别有22和12个氨基酸种类不同,其中大部分位于CDR区域,而改变的氨基酸使得可变区结合位点的疏水性增强。分子对接实验表明,4-AP的酚羟基与重链CDR3的Ser-99形成氢键,CDR区域内大量的疏水性氨基酸形成空腔将苯环和烷基链包裹,从而实现抗原抗体的结合,抗体戊-13结合位点的疏水作用力增强是其亲和力增加的主要原因。本文制备出亲和力和特异性良好的APs单克隆抗体,为APs含量检测提供一种新方法,通过可变区序列的比对和同源建模实验找出影响亲和力大小的关键性氨基酸和作用力,为后续scFv的研究和基因工程改造奠定基础。