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目的肺动脉高压是指肺动脉内压力高于正常,在海平面水平,正常人静息状态下肺动脉收缩压的正常范围是20-25mmHg,肺动脉平均压测量值<20mmHg。如肺动脉收缩压大于30mmHg,或肺动脉平均压大于或等于20mmHg则认为存在肺动脉高压。肺动脉收缩增强和肺血管结构重建是肺动脉高压主要的病理生理改变。肺血管收缩反应增强属功能性改变,是可逆的；肺血管结构重建以肺动脉平滑肌细胞增殖,无肌型动脉肌化,胶原等细胞外间质在肺血管壁沉积为特征,属不可逆性的结构性改变。近年来人们发现了一种新的血管活性物质—肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM),它的降压效应引起了人们的注意。ADM可显著降低低氧性肺动脉高压大鼠及肺动脉高压病人的肺动脉压力,改善心功能。研究证实ADM前体(proadrenomedullin,proADM)在体内经内源性肽酶的作用可以降解产生4个不同的活性肽段,PAMP, proADM45-92, ADM,和ADT。ADM具有扩血管、抑制平滑肌细胞增殖的作用。ADT可收缩血管、升高血压和促进血管平滑肌细胞增殖。通过对主动脉和血管平滑肌细胞增殖的研究发现,ADM和ADT这两个同一前体分子的不同肽段在血管活性上相互拮抗,在释放上交互抑制,这是分子内调控(intramolecular regulation, IMR)学说的一种表现,即同一心血管活性多肽的前体分子内部不同肽段之间存在的相互调节现象。分子内调控学说的提出对于研究ADM体系在左向右分流肺动脉高压形成机制和肺血管结构重建中的作用提供了一条全新的思路。本研究的目的是检测肾上腺髓质素(ADM)和肾上腺加压素(ADT)对培养的Wistar大鼠肺动脉平滑肌细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响,探讨细胞外信号调节激酶途径是否参与了肺动脉平滑肌细胞增殖过程。为ADM通过阻止MAPK这一细胞增殖的最终途径来实现其延缓肺动脉高压发生的说法提供理论依据。方法1、取2-3月龄、180g左右健康雄性Wistar大鼠,行大鼠远端肺动脉平滑肌细胞(PASMC)分离并进行原代培养,采用平滑肌α-actin单克隆抗体对培养的细胞进行鉴定,传代至4-7代,酸处理盖玻片放入六孔板内做细胞爬片。2、在不同培养基内分别加入不同浓度(10-6mmol/L,10 mmol/L7,10-8 mmol/L)的肾上腺髓质素(ADM)、肾上腺加压素(ADT),培养72小时,4%多聚甲醛固定前3小时掺入Brdu(5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷),一抗为Rabbit Anti-Brdu,部分培养基内不加一抗,用0.1mol／LPBS代替,作阴性对照,二抗为FITC标记山羊抗兔IgG,用免疫荧光法,观察PASMC增殖情况。3、在不同培养基内分别加入10-7 mmol／L的ADM或ADT培养72小时,一抗分别为Rabbit Anti-ERK1, Rabbit Anti-Collagen-Ⅰ, Rabbit Anti-Collagen-Ⅲ部分培养基不加一抗,用0.1mol／LPBS代替,作阴性对照,二抗为FITC标记山羊抗兔IgG,免疫荧光法观察肺动脉平滑肌细胞内Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原及ERK表达。结果1、采用平滑肌α-actin单克隆抗体对培养的细胞进行鉴定,其纯度达97%。2、Brdu掺入实验显示肾上腺髓质素对肺动脉平滑肌细胞增殖有抑制作用,且10-7mmol／L抑制作用最强(P<0.001)；肾上腺加压素对肺动脉平滑肌细胞增殖有促进作用,且10-7mmol／L促进作用最强(P<0.001)。3、10-7mmol／L肾上腺髓质素可抑制培养的PASMCⅠ型和Ⅲ型胶原的表达(P<0.05)；10-7mmol／L肾上腺加压素刺激后的大鼠肺动脉平滑肌细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达增强(P<0.05)。10-7mmol／L的ADM可抑制培养的肺动脉平滑肌细胞ERK表达(P<0.05)；10-7mmol／L的ADT可使培养的肺动脉平滑肌细胞ERK表达增强(P<0.05)结论1、本研究成功分离并培养了大鼠肺动脉平滑肌细胞,经α-actin免疫荧光染色鉴定培养纯度达97%。2、肾上腺髓质素可抑制肺动脉平滑肌细胞增殖；肾上腺加压素促进肺动脉平滑肌细胞增殖。3、ADM可抑制肺动脉平滑肌细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成及表达；而ADT可促进肺动脉平滑肌细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成与表达,这是分子内调控的表现。4、ADM刺激后培养PASMC的ERK表达降低,而ADT刺激后培养肺动脉平滑肌细胞ERK表达增强,提示细胞外信号调节激酶信号通路参与了PASMC增殖过程。