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实验背景:急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是一种常见的临床综合症,其特点是顽固性低氧血症、进行性呼吸困难和非心源性肺水肿等。多种肺内外因素可引起急性肺损伤的发生,目前认为过度的炎症反应和抗炎失衡在其中发挥重要作用,但是具体发病机制还未完全阐明。临床上仍以支持治疗为主,病死率依然很高。核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)是一组真核细胞转录因子,参与多种细胞活动,具有关键的生物学功能,尤其是调节机体的免疫应答和炎症反应。大量炎症因子的表达均与NF-κB的活化密切相关。可以说NF-κB在炎症的发生发展中处于关键环节,因此,抑制了NF-κB就能有效的抗炎,减轻肺损伤。人羊膜上皮细胞(human amnion epithelial cells,h AECs)是羊膜上一层单层立方或柱状细胞,与羊水直接相接触。h AECs表达阶段特异性胚胎抗原-4(stage-specific embryonic antigen-4,SSEA-4)、SSEA-3、关键蛋白(NANOG)和八聚体物结合转录因子-4(octamer-binding transcription factor-4,OCT-4)等分子标志物,具有胚胎干细胞特性。hAECs具有向三个胚层组织细胞分化的能力,此外,hAECs不表达或很少表达Ⅰ型和Ⅱ型人类白细胞抗原,而且还表达免疫抑制型的人体白细胞抗原G,从而使h AECs具有很强的免疫豁免能力,在疾病治疗方面显示出很大的潜能。我们通过气管内给予脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)建立小鼠ALI模型,经气管内滴注hAECs进行治疗,探讨h AECs对急性肺损伤小鼠模型的治疗作用及其可能的机制。实验目的:(1)明确人羊膜上皮细胞(h AECs)是否对LPS所致急性肺损伤有治疗作用。(2)明确人羊膜上皮细胞(h AECs)对NF-κBp65的影响,人羊膜上皮细胞的应用是否能减少NF-κBp65的表达,从而减轻肺损伤的炎症。实验方法:健康成年雄性C57BL/6小鼠随机分成正常对照组(Control)、hAECs对照组(h AECs)、模型组(LPS)和hAECs治疗组(LPS+hAECs),每组10只。模型组(LPS)的小鼠经口咽无创插管缓慢滴注LPS 5 mg/kg,1 h后再注入PBS(50μl);hAECs治疗组(LPS+h AECs)的小鼠经口咽无创插管缓慢滴注LPS 5 mg/kg,1 h后再注入hAECs(1×107/ml,50μl);hAECs对照组和正常对照组则经口咽插管注入等量hAECs或PBS。经过LPS处理后24 h,正常处死小鼠,从心脏处收集血液并收集肺脏组织,右肺部分组织用来计算肺组织湿/干质量(W/D)比值;部分用于检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性;余下肺组织用来提取细胞浆/细胞核蛋白;左肺用于HE染色观察小鼠肺组织病理学改变;应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中IL-6、IL-1β、IL-10及TNF-α含量;Western blot法检测肺组织核转录因子-κBp65(NF-κBp65)蛋白的表达。实验结果:与正常对照组相比,LPS处理后小鼠肺组织W/D增大,血清中IL-6、IL-1β及TNF-α含量增加(P<0.05),而IL-10的含量却有所减少(P<0.05);MPO活性明显增高;光学显微镜下观察,可见肺组织微血管破坏、肺泡间隔增厚、发生肺水肿、并有炎性细胞浸润、肺泡腔内出现渗出的红细胞,与ALI的病理变化相吻合;上述各项结果都表明经口咽插管滴注LPS诱导小鼠ALI的模型建立成功。应用hAECs后,我们发现h AECs可以减小LPS导致的肺W/D比值;血清中炎症因子IL-6、IL-1β及TNF-α含量有一定的降低(P<0.05),炎症因子IL-10水平则表现为上升(P<0.05);MPO活性降低;病理变化方面,hAECs明显改善LPS造成的肺组织损伤,肺水肿减轻,炎症反应减弱;表明hAECs在LPS诱导的ALI中有保护性作用。LPS处理组肺组织细胞浆中NF-κBp65蛋白比对照组中明显减少(P<0.05),而其在细胞核中的含量明显增加(P<0.05);LPS+h AECs组肺组织细胞浆中NF-κBp65蛋白比LPS处理组有所增加,而细胞核中的NF-κBp65蛋白含量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结果提示hAECs在一定程度上抑制了NF-κBp65的核转位。实验结论:(1)h AECs可显著减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤。(2)h AECs减轻急性肺损伤的作用可能与降低肺组织中NF-κBp65的活性,减少炎症因子的产生有关。