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背景癫痫是儿童最为常见的神经系统疾病之一。据世界卫生组织公布,在全球范围内,每年约有240万人被诊断为癫痫,其中约2/3为儿童。目前诊断癫痫主要依靠临床病史、脑电图和脑成像,但患儿及家属提供的病史一般不够详尽,一般脑电图捕捉到痫性放电波的可能性较低,除非行持续的视频脑电图监测,许多癫痫患者的脑成像是阴性的,这些因素均会导致癫痫诊断错误或延迟。因此寻找一种客观、准确的生物标志物来诊断儿童癫痫是一项急需解决的问题。与癫痫有关的生物标志物主要是电生理、影像学与分子,在这几种类型中,分子生物标志物特别有吸引力,因为它们提供了快速、简单和廉价的床边检测的可能性。许多研究表明miRNA作为一种新兴的脑部疾病生物标志物参与了癫痫的发生发展。外泌体作为一种新型的细胞间通讯工具,其不仅能够介导miRNA的转运,且能够自由通过血脑屏障。由于外泌体脂质双层膜的保护,miRNA能够进行长时间、长距离的运输而不被内源性核糖核酸酶降解。近年来,外泌体miRNA作为生物标志物在许多中枢神经系统疾病的很高的诊断价值,如阿尔兹海默病及帕金森。阅读相关文献,我们选择在动物癫痫模型和癫痫患者血清中均明显上调的微小RNA-155(miR-155)作为研究目标。通过提取癫痫患儿及健康儿童血清中的外泌体,对比血清外泌体中miR-155在癫痫儿童及健康儿童的差异性表达,从而为癫痫的诊断提供一种潜在的生物标志物。目的对比血清外泌体中miR-155在癫痫儿童与健康儿童的表达差异,探讨血清外泌体中miR-155对儿童癫痫的诊断价值。方法收集2017年10月至2018年10月在郑州大学第一附属医院收治的首次确诊为癫痫的患儿30例入组癫痫组,选取性别与年龄与癫痫组匹配的同期在本院体检的健康儿童30例入组健康对照组。应用超速离心法提取血清中的外泌体,应用透射电子显微镜、纳米粒径跟踪分析仪、Western Blot鉴定外泌体,利用Nanodrop对RNA的纯度进行测试。运用实时定量PCR(Quantitative Real-time PCR)检测miR-155在癫痫患儿血清外泌体、去除外泌体的血清悬浮液及健康儿童外泌体中的表达情况,使用SPSS24.0软件对其表达差异进行统计学分析,P<0.05认为差异有统计学意义。随后制作出受试者工作特性曲线(ROC曲线):对差异表达的miR-155进行ROC曲线分析,以评价血清外泌体中非编码miR-155对诊断儿童癫痫的可能性。结果1.透射电镜及纳米粒径跟踪分析仪方法鉴定血清中的外泌体,能够检测到直径为30-100nm的微囊泡,且Western Blot能够检测到外泌体标记蛋白CD63、CD9的表达。2.与健康对照组对比,癫痫组血清外泌体miR-155明显上调,差异具有统计学意义(t=4.783,P<0.05)。3.通过比较癫痫组提取的外泌体中与去除外泌体的血清悬浮液中的miR-155的含量,miR-155在外泌体中比去除外泌体的血清悬浮液明显上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.癫痫组血清外泌体miR-155的曲线下面积为AUC值为0.811,特异度为70%,敏感度为83.3%,截断值为1.49。结论1.本研究应用超速离心法能成功从血清中提取到外泌体。2.本研究表明miR-155在癫痫组血清外泌体中的表达水平明显高于健康对照组,推测外泌体miR-155可能参与了癫痫的发病机制。3.本研究表明miR-155在外泌体中比去除外泌体的血清悬浮液高,外泌体miR-155可能对癫痫更具有诊断价值。4.本研究表明当血清外泌体miR-155的表达水平大于1.49时,提示可能患有癫痫。