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近年来,神经细胞的培养已成为研究的热点,并在体外已成功地分离和培养了神经干细胞,为人类神经系统疾病,特别是神经退行性病变,如帕金森综合症、髓鞘疾病、脊髓损伤、老年痴呆等疾病提供理论依据。本实验以SD 大鼠为材料,无菌条件下体外分离并培养海马神经细胞,利用台盼蓝染色、Nissl 染色、透射电镜、MTT 等方法鉴定、检测神经元,得到如下实验结果: 1.以健康、发育正常的220g-300 g SD 大鼠为材料,采用机械法或EDTA-胰酶消化法分离海马神经细胞,并优化体外培养条件,以4×10~5 个/mL 的密度接种于神经细胞培养液,在37℃、5%CO2 的条件下可培养14～24 d,细胞生长良好。2. EGF 对大鼠海马神经细胞生长具有明显作用,能促进神经元存活及突起生长,尤其对轴突生长的促进作用是显著的。神经细胞的形态学变化与EGF 浓度呈线性相关,培养液中添加20 ng/mL 的EGF 为最佳浓度,其形态观察发现细胞形成更为复杂的、高度的枝状突起,与对照组之间差异极显著(P<0.01)。10 ng/mL EGF 和100 ng/mL EGF 组与对照组相比,差异显著(P<0.05),但二者之间差异不显著(P>0.05)。3.不同浓度Vc 对大鼠海马神经细胞生长具有一定的影响,实验结果表明,较高浓度200 nmol/L Vc 能显著促进神经细胞的存活数、细胞突起数目、长度、胞体面积均显著高于对照组(P<0.01);而高浓度Vc 组(2000 nmol/L )显著减少细胞的存活数,可以引起细胞凋亡。4.以两种不同基质多聚左旋赖氨酸(Poly-l-lysine, PLL)和鼠尾胶原及其分别作为基质及其联合应用处理神经细胞,结果表明,PLL组的细胞贴壁时间短,但分散较为均匀,聚集成团生长的现象较为少见,细胞脱落时间早。鼠尾胶原组的贴壁细胞相互聚集成团生长,细胞贴壁时间长,细胞脱落时间晚。PLL与鼠尾胶原联合应用组的贴壁细胞形态基本同PLL组,细胞分散比较均匀,少有成团现象,胞体有明亮的光晕,长出细短突起,随着培养时间延长,绝大部分长出突起且突起较长并与相邻的细胞形成纤维交织成网状。培养时间长,细胞脱落时间晚。5.本试验采用血清培养方法,并通过添加表皮生长因子(EGF)等能够成功培养出成年大鼠海马神经细胞,建立了神经细胞体外培养体系。