论文部分内容阅读
奶牛乳腺炎是危害奶牛业的重大疾病之一,分为临床型乳腺炎和隐性乳腺炎,临床型乳腺炎大多是由病原菌引起,可依据常规诊断方法做出诊断,隐性乳腺炎依据常规诊断方法很难做出判断,同时,由于其对奶牛业造成的损失巨大,因此对规模化奶牛养殖场乳腺炎特别是隐性乳腺炎流行病学调查至关重要。而对患隐性乳腺炎奶牛的判定,目前国际上常用的方法是根据牛奶中体细胞数经过校正后的牛奶体细胞评分(SCS)来确定,SCS<5为正常健康牛,SCS>5为感染乳腺炎的患病牛。隐性乳腺炎与多种因素有关,遗传是其中一个因素,在相同环境与管理条件下,奶牛个体对乳腺炎的易感性存在着较大的差异。从遗传角度来讲,抗奶牛乳腺炎基因有很多,而IRAK及其受体是已发现的乳腺炎抗性基因之一,共有4个家族成员,其中IRAK2是TLRs信号转导通路上的信号分子之一。本研究以我国天津、济南、青岛、东营的10个规模化中国荷斯坦奶牛养殖场共1361头泌乳期奶牛作为研究对象,以常规诊断方法作为临床型乳腺炎的判定标准和以SCS作为隐性乳腺炎判定标准进行流行病学调查,并以乳腺炎抗性相关基因IRAK2作为候选基因,研究其与泌乳性状及体细胞评分之间的相关性,并探讨建立基因分型检测方法的可行性,为我国规模化奶牛养殖场牛群乳腺炎流行情况提供理论数据和在实践中从奶牛自身乳腺炎抗性方面防治该病提供参考依据。在所研究的奶牛群体中,检测出临床型乳腺炎发病率为2.87%,主要致病菌为金黄色葡萄球菌、停乳链球菌、无乳链球菌、大肠杆菌,隐性乳腺炎阳性率为50.53%。经χ~2检验,乳腺炎发病率在5-6月、7-8月、9-10月分别与1-2月间差异显著,在第2-6胎分别与第1胎之间阳性率差异极显著。与中国荷斯坦牛泌乳性能的关联分析表明,乳腺炎抗性基因IRAK2位点g.40035基因型TT个体的乳蛋白率高于TC基因型个体(P<0.05);位点g.40120纯合子CC基因型个体的乳脂率大于杂合子TC基因型个体(P<0.05)。与体细胞评分相关性分析表明,g.28879位点的CC基因型个体体细胞评分显著低于CT基因型个体(P<0.05),且以加性效应为主;位点g.28916的GG基因型个体显著低于AG基因型个体(P<0.05)。共检测到30个单倍型和71种单倍型组合,与SCS相关性分析表明,H21H23(TTAGGCTCCC)单倍型组合个体体细胞评分最低,H7H27(CTAGGGTCCC)单倍型组合个体体细胞评分最高。采用PCR-SSCP方法检测到IRAK2基因第7外显子出现三种不同带型,并用PCR-RFLPs方法,经RsaI内切酶对PCR产物进行酶切后也出现三种不同的带型,这与NCBI报道一致,为采用PCR-SSCP联合酶切方法建立IRAK2基因分型检测方法的可行性提供理论参考。