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目的通过体外实验探讨慢性应激对胶质瘤迁移能力的调控作用;进而探讨上皮-间质转化(EMT)通路中转录因子Twist1在慢性应激对胶质瘤迁移中的作用,以期为胶质瘤的治疗提供治疗靶点。方法通过构建并包装含有Twist1敲低序列和过表达的慢病毒,将获得的慢病毒对神经胶质瘤细胞LN229、U251进行感染,从而获得Twist1敲低和过表达的LN229、U251细胞系;应用10μmol/m L的去甲肾上腺素(NE)处理LN229、U251细胞以及Twist1敲低和过表达的LN229、U251细胞;通过细胞划痕实验检测神经胶质瘤细胞LN229、U251迁移状况;应用Transwell实验检测神经胶质瘤细胞LN229、U251穿行数量;通过显微镜观察NE对神经胶质瘤细胞LN229、U251细胞形态的变化;应用q PCR和Western Blot方法检测E-cadherin、Ncadherin、Fibronectin、Vinmentin以及转录因子Twist1的蛋白和m RNA的表达。结果1划痕实验表明,与对照组相比,NE作用LN229、U251细胞24h以及48h后细胞的迁移能力增加(P<0.01);2 Transwell实验表明,与对照组相比,NE作用LN229、U251细胞后细胞的穿行数量分别是对照组的1.23倍、1.91倍(P<0.01);3形态学观察显示对照组细胞形态为粗短型,而应激组细胞变为细长型,符合EMT上皮向间质细胞转化的细胞形态;4与对照组相比,NE作用LN229、U251细胞后细胞上皮标志物E-cadherin m RNA表达分别下降2.79倍和2.61倍,而间质标志物N-cadherin、Fibronectin、Vinmentin的m RNA表达分别上升3.38倍和3.03倍、2.58倍和1.71倍、5.34倍和3.74倍(P<0.01);5与对照组相比,NE组Twist1表达显著增加,差异有统计学意义;6与对照组相比,敲低Twist1的LN229、U251细胞的m RNA和蛋白表达明显下降,其中m RNA表达分别降低87.91和91.11%,蛋白表达分别降低90.32%和91.18%(P<0.01);过表达Twist1组细胞中Twist1的m RNA和蛋白表达明显升高,其中m RNA表达升高倍数分别为19.81倍和15.25倍,蛋白表达升高倍数为9.89倍和12.85倍(P<0.01);7划痕实验显示,与对照组相比,NE作用Twist1敲低的LN229、U251细胞后,其迁移能力减弱(P<0.01),反之,NE作用过表达Twist1组的细胞迁移能力明显提高(P<0.01);8与对照组相比,NE作用敲低Twist1组LN229、U251细胞的上皮标志物E-cadherin的m RNA以及蛋白表达升高,其中m RNA升高的倍数分别为2.29倍和4.09倍,蛋白升高的倍数分别为1.86倍和1.62倍,而间质细胞标志物N-cadherin、Fibronectin、Vinmentin的m RNA以及蛋白表达水平下降,其中m RNA表达分别降低36.86%和46.31%、27.75%和42.38%、31.54%和71.8%,蛋白分别下降30.71%和17.96%、63.86%和67.96%、58.1%和72.05%(P<0.01);此外,过表达Twist1后上皮细胞标志物E-cadherin的m RNA以及蛋白表达下降,其中m RNA表达分别降低了64.86%和57.63%,蛋白表达下降了64.88%和90.37%,而间质细胞标志物N-cadherin、Fibronectin、Vinmentin的m RNA以及蛋白表达水平均增加(P<0.01)。结论1.慢性应激能够促进胶质瘤细胞的迁移;2.EMT通路中转录因子Twist1的表达在慢性应激促进胶质瘤细胞迁移过程中发挥重要作用。图17幅;表3个;参126篇。