本实验室从一猝死牛脾脏内分离到一株细菌,经鉴定该菌为致病性蜡样芽孢杆菌。由于目前未有蜡样芽孢杆菌侵染牛致死的相关报道,因此对菌株进行分离鉴定,并针对该菌的nhe基因建立RPA-LF检测法,以期对该病的研究及防控提供理论依据。试验通过细菌的形态学观察、生化检测、16S rDNA及groEL基因序列分析等方法对细菌进行鉴定。经药物敏感性、耐酸耐胆盐性、耐高温性、动物致病性及感染鼠病理组织切片观察等试验对其生物学特性进行检测。之后通过PCR检测及碱基序列测定对该菌所含毒力基因进行检测分析,再针对该菌的毒力基因nhe建立RPA-LF快速检测法。试验结果可见,该菌为革兰氏阳性杆菌,呈单个或链状排列,生化检测、16S rDNA及groEL基因分析表明该菌株为蜡样芽孢杆菌;生物学特性检测结果显示该菌对头孢氨苄、庆大霉素、诺氟沙星等药物敏感,具有耐酸性、不耐胆盐、与其他蜡样芽孢杆菌相比耐高温性不强,对小鼠有较强的致死性且可导致小鼠各脏器发生不同程度的病变;毒力基因检测结果表明该菌含有毒素hbl、nhe、entFM、cytk的毒力基因:经优化,nhe基因RPA-LF检测法的最佳反应温度为38℃、最低有效反应时间为10 min、最低有效检测细菌浓度为1.0×102CFU·mL-1,不与产气荚膜梭菌等细菌发生交叉反应。本研究结果表明:分离菌为致病性蜡样芽孢杆菌且含有毒素hbl、nhe、cytk、entFM。成功建立了 nhe基因RPA-LF检测方法,该方法特异性强且敏感性高。