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背景原型泡沫病毒(Prototype foamy virus,PFV)隶属于逆转录病毒科泡沫病毒亚科泡沫病毒属。泡沫病毒在自然界有着较广泛的宿主范围,由于原型泡沫病毒最早是从人体中分离出来,因此也被称为人泡沫病毒(Human foamy virus,HFV)。泡沫病毒感染动物后,虽能引发宿主轻微免疫应答,却能引起动物持续低水平感染,直至终生,而不表现出任何病理损伤。泡沫病毒具有复杂的基因组结构,PFV是迄今发现的基因组最长的逆转录病毒,两端为长末端重复序列(long terminal repeat,LTR),LTR可帮助PFV整合到宿主基因组,并决定PFV病毒蛋白的转录起始;PFV基因组内部还包含有内部启动子(internal promoter,IP),可影响PFV反式激活因子Tas和Bet的转录;并且PFV反式激活因子Tas可同时激活PFV LTR和IP启动子,因此Tas在PFV复制过程中起着至关重要的作用。近些年,病毒与宿主细胞间的相互作用成为病毒感染研究中的热点,对泡沫病毒的研究亦是如此。对于宿主调节泡沫病毒感染的研究中,过去人们主要关注泡沫病毒的不致病性研究,目前却较少关注宿主蛋白通过调控抗病毒信号通路促进泡沫病毒复制的机制。目的本研究目的是筛选出PFV感染过程中表达异常且能显著调控PFV病毒感染的蛋白分子,并初步探讨筛选出的蛋白分子IFRD2(Interferon Related Developmental Regulator 2,干扰素相关发育因子2)调控PFV复制的机制。方法1.从PFV感染和未感染细胞的RNA-seq数据(本实验室保存结果)中筛选出表达差异显著的基因。进一步挑选其中10个下调基因与5个上调基因,并分别设计其特异性Q-PCR引物,用Q-PCR实验检测PFV感染组与未感染组中各基因mRNA水平的表达。2.经过上述筛选,选择IFRD2为本论文研究对象。构建flag-IFRD2过表达质粒,并将其转染至PFV易感细胞系HT1080中,于24h后感染PFV;感染48h后,用Q-PCR和Western Blot实验初步验证IFRD2对PFV感染的影响。3.在293T细胞中,PFV病毒反式激活因子Tas存在和不存在的条件下,用Luciferase reporter assay检测过表达IFRD2对PFV LTR-luc(长末端重复序列)和IP-luc(内部启动子)的激活效应。并用ChIP实验检测IFRD2在PFV LTR和IP上的富集情况。4.在HT1080细胞中,用Q-PCR检测PFV引起的细胞因子的表达,同时用Western Blot检测PFV感染对p65乙酰化的影响;以及检测过表达IFRD2对PFV引起的细胞因子的表达和p65乙酰化水平的调控效应。5.经过上述试验验证出IFRD2可调控PFV引起的IL-8的表达。同样在HT1080细胞中过表达IFRD2 24h后给予1μg/ml的poly(I:C)处理10h,用Q-PCR和ELISA检测IFRD2对poly(I:C)引起的IL-8表达的调控。同时,利用Western blot实验检测IFRD2对IL-8上游分子p65/JNK/p38等的调控。6.HT1080细胞感染PFV24h后,给予人重组IL-8处理,检测IL-8对PFV复制的影响。结果1.IFRD2能够促进PFV的复制,但不是通过直接调控PFV的LTR和IP启动子。2.IFRD2能够抑制PFV感染引起的IL-8表达及poly(I:C)处理后引起的IL-8表达,但IFRD2抑制IL-8的表达为p65信号通路非依赖。3.IFRD2可能通过调节MAPK信号通路进而调控PFV复制结论干扰素相关发育因子IFRD2通过抑制炎性应答进而促进PFV复制。