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目的:血管钙化在临床上常见于老年退行性心脏病、冠心病、糖尿病和慢性肾功能不全的患者,是导致血管成形术后内膜撕裂、心肌梗死等临床心血管事件的重要危险因素。它是动脉粥样硬化、老年人单纯收缩期高血压及糖尿病等多种疾病的病理基础。主动脉钙化使主动脉的硬度增加,使血管的顺应性降低,易导致心肌缺血、左心室肥大和心功能不全等疾病的发生。目前经过大量的体外及活体实验证实,血管钙化为主动过程,是血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）在基因调控下,发生转型、分化,并受多种因素影响的结果。深入研究VSMCs钙化的发病机制,预防、延缓或逆转VSMCs钙化的发生,具有重要的临床意义。研究报道,GATA-6和钙调神经磷酸酶（Calcineurin, CaN）在细胞凋亡、骨代谢以及心肌细胞肥大等变化中有一定的调节作用。在不同的VSMCs中,CaN去磷酸化,激活其底物活化T细胞核因子（Nuclear factor of activated T cells, NFATc）,并与核内的GATA-6相互作用,协同激活平滑肌特异性Sm-MHC的表达,在此调节过程中,GATA-6与DNA的结合被CaN降低,那么由此也下调了平滑肌肌球蛋白重链Sm-MHC的转录活性。说明在VSMCs的转录（转型、分化、增殖）过程中,有GATA和CaN的参与。因为VSMCs表型转化在VSMCs钙化中很重要,所以推测在VSMCs钙化的过程中,很可能CaN、GATA-6也起到调节作用。CaN、GATA-6是否参与VSMCs钙化的调节过程,及其参与VSMCs钙化中的作用及机制目前尚不清楚。本试验采用高磷培养基建立大鼠胸主动脉平滑肌细胞钙化模型,测定VSMCs中CaN mRNA、蛋白质的表达及活性和GATA-6 mRNA、蛋白质的表达,VSMCs中钙离子活性,碱性磷酸酶ALP活性,并观察CaN特异性抑制剂环孢霉素A（CsA）对CaN mRNA、蛋白质及GATA-6 m RNA、蛋白质的表达及对VSMCs钙化的影响,初步探讨CaN、GATA-6对大鼠胸主动脉平滑肌细胞钙化的调节作用,为临床防治VSMCs钙化提供新的思路。方法:大鼠胸主动脉平滑肌细胞（A7r5）1株,经传代培养后,随机分为3组,A组:对照组;B组:钙化组;C组:钙化+CsA组简称环孢霉素A组（CsA组）。A组给予正常对照的培养基,B组给予磷酸二氢钠配制浓度为2mmol/L的高磷培养基,C组给予磷酸二氢钠配制浓度为2mmol/L的高磷培养基同时加入（5ug/ml）的环孢霉素A,分别培养6天,每3天换液一次,于第6天收集细胞。将收集的各组细胞,光镜下观察茜素红染色大鼠胸主动脉平滑肌细胞钙化的情况,比色法测定碱性磷酸酶（ALP）活性,ELISA法测定大鼠胸主动脉平滑肌细胞的钙离子活性及钙调神经磷酸酶（CaN）活性,实时荧光定量反转录PCR法测定CaNB mRNA、GATA-6 mRNA ,Western Blot方法测定CaNB蛋白、GATA-6蛋白。所有数据以均数±标准差（x±s）表示,运用SPSS 13.0统计软件,首先对计量资料进行正态性检验及方差齐性检验,组间资料比较应用单因素方差分析,两两比较应用LSD-t检验,P<0.05即有统计学意义。结果:（1）茜素红染色结果示对照组大鼠胸主动脉VSMCs呈梭形,排列整齐,未见钙化点。钙化组大鼠VSMCs呈梭形或多角形,排列紊乱,可见褐色钙化点。CsA组大鼠VSMCs呈梭形或多角形,排列紊乱,可见大量褐色钙化点。（2）ELISA法测定大鼠VSMCs Ca2+定量分析结果显示,钙化组（9.01±0.32pg/ml）较对照组（6.03±0.33pg/ml）Ca2+定量显著增加（P<0.01）,CsA组（10.39±0.70pg/ml）较对照组（6.03±0.33pg/ml）Ca2+定量显著增加（P<0.01）,且较钙化组（9.01±0.32pg/ml）Ca2+定量显著增加（P<0.05）。（3）比色法测定细胞内碱性磷酸酶（ALP）活性结果显示,钙化组的ALP活性(146.04±9.02 U·g-1protein)较对照组(38.74±2.23 U·g-1protein)显著增高（P<0.01）;CsA组(216.69±14.00 U·g-1protein)较对照组(38.74±2.23 U·g-1protein)显著增高（P<0.01）,且较钙化组(146.04±9.02 U·g-1protein)显著增高（P<0.01）。（4）ELISA法测定大鼠VSMCs CaN活性表达结果显示,钙化组（21.47±1.86IU/L）较对照组（14.31±0.24IU/L）表达显著增加（P<0.01）, CsA组（15.34±0.14IU/L）较对照组（14.31±0.24IU/L）表达无显著变化（P >0.05）,但较钙化组（21.47±1.86IU/L）表达显著减少（P <0.01）。（5）实时荧光定量反转录PCR法测定CaNB mRNA表达结果显示,钙化组CaNB mRNA表达（6.27±1.45）较对照组（1.10±0.28）显著增加（P<0.01）;CsA组（3.38±0.77）较对照组（1.10±0.28）表达显著增加（P<0.01）,而较钙化组（6.27±1.45）表达减少（P<0.01）。同样用此法测定GATA-6 mRNA表达结果为钙化组GATA-6 mRNA表达（0.30±0.06）较对照组（1.09±0.27）显著减少（P<0.01）;CsA组（0.69±0.12）较对照组（1.09±0.27）表达显著减少（P<0.01）,而较钙化组（0.30±0.06）表达增加（P<0.01）。（6）Western blot法测定CaN B蛋白表达结果显示,钙化组CaNB表达（69.11±2.51）较对照组（29.9±1.39）显著增加（P<0.01）;CsA组（48.22±2.47）较对照组（29.9±1.39）表达显著增加（P<0.01）,而较钙化组（69.11±2.51）表达减少（P<0.01）。同样用此法测定GATA-6蛋白表达结果为钙化组GATA-6蛋白表达（0.40±0.05）较对照组（1.67±0.20）显著减少（P<0.01）;CsA组（0.85±0.21）较对照组（1.67±0.20）表达显著减少（P<0.01）,而较钙化组（0.40±0.05）表达增加（P<0.01）。结论:1.本实验采用高磷培养基成功地建立了大鼠胸主动脉平滑肌细胞钙化模型,并且在光镜下观察钙化大鼠胸主动脉VSMCs的结构变化。2.本试验首次发现钙化大鼠胸主动脉平滑肌细胞中CaN mRNA和蛋白的表达和活性明显增加, GATA-6 mRNA和蛋白的表达明显减少,而钙离子定量及碱性磷酸酶活性相对于环孢霉素A组却有所减少,说明CaN、GATA-6参与VSMCs钙化的调节过程。CaN对GATA-6可能有抑制作用。3.免疫抑制剂CsA很可能促进VSMCs钙化。