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目的:
本研究采用免疫组化方法对45例功能性鼻内镜手术并资料完整的患者鼻腔黏膜中转化生长因子-β1(transforminggrowth factor-β1,TGF-β1),白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1),白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)进行检测。探讨其表达规律与发病、预后的关系,为预防鼻窦炎鼻息肉术后复发提供理论依据,更好地指导临床治疗。
方法:
1材料
45例在我院根据临床症状、前鼻镜检查、鼻内窥镜检查、CT扫描、组织病理检查确诊的慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉,行FESS手术并且术后定期随访(>3月)的患者,按1997海口标准进行临床分型:Ⅰ型15例,Ⅱ型22例,Ⅲ型8例为实验组。对照组12例,为单纯行鼻中隔偏曲矫正手术患者。均采用Messerklinger术式。用于光镜、免疫组化的标本均为鼻腔黏膜,在术中、术后7天、1个月及术后3个月随访时取得。标本采集部位:在内窥镜下用镰状刀切取患者鼻窦-窦口复合体黏膜。对照组粘膜标本来自行鼻中隔手术患者鼻窦-窦口复合体黏膜,病理证实为正常黏膜。所有研究病例手术均由作者所为。
2染色方法
标本经10%中性甲醛固定,石蜡包埋,作5微米厚的连续切片,HE染色和免疫组化SP法染色。
3结果判定
45例术后组织HE染色,病理确诊为慢性炎症伴息肉,以嗜酸粒细胞浸润为主。
免疫组化染色显示IL-1、IL-8、TGF-β1免疫阳性染色物呈棕黄色颗粒,主要在黏膜上皮层及黏膜下层的细胞浆及炎性细胞胞浆内。对照组中鼻道上皮组织,少见免疫阳性物质。
计数方法:将目镜上配计数格(5 mm×5 mm,6×6条线),计数10个阳性区域的高倍视野,取平均值,根据阳性细胞的比例可以分为:阴性(-):10个高倍视野未见或偶见阳性细胞;弱阳性(+):每计数格内阳性细胞≤5个;阳性(++):每计数格内阳性细胞6~10个;强阳性(+++):每计数格内阳性细胞>10个。每张切片任选5个视野(×400),分别计数组织中IL-1、IL-8、TGF-β1阳性细胞数,计算均数。
4统计方法
所有数据资料经Excel整理,应用SPSS 11.0统计软件中的相关统计分析。进行t检验,x2检验,方差分析,SNK-q检验,以P≤0.05为差异在统计学上有显著性意义,以P≤0.01为差异在统计学上有非常显著性意义。
结果:
1HE染色光镜下观察1.1正常中鼻道粘膜组织结构光镜下可见,表面为假复层柱状上皮所覆盖,上皮基底部有完整的基底膜,其下疏松结缔组织中有丰富的血管,散在炎性细胞,内含丰富腺体。
1.2鼻息肉的病理光镜下可见,表面多为假复层柱状上皮及复层柱状上皮所覆盖,也有的在息肉表面出现鳞状上皮及移行上皮,粘膜下组织高度水肿,为疏松结缔组织组织,间隙扩大,有较多的炎性细胞浸润及腺体扩张。
1.3鼻窦炎病变粘膜组织病理光镜下可见,粘膜组织充血水肿,有炎性细胞浸润,粘膜肥厚,甚至呈息肉状,乳头状增生,腺泡扩张,有的形成潴留囊肿。
1.4FESS术后7天的术腔残余粘膜组织结构光镜下可见表面为假复层柱状纤毛上皮所覆盖,组织高度水肿,上皮下为疏松结缔组织,并含有丰富腺体。
1.5FESS术后1月的术腔残余粘膜组织结构光镜下可见表面为假复层柱状纤毛上皮所覆盖,组织水肿稍减轻,上皮下为疏松结缔组织。
1.6FESS术后3月的术腔残余粘膜组织结构光镜下可见表面为假复层柱状纤毛上皮所覆盖,组织水肿明显减轻,上皮下为疏松结缔组织并含有腺体。
2免疫组化染色2.1术前与对照组比较,组织中IL-1、IL-8、TGFβ1的表达显著高于对照组。
2.2IL-1、IL-8在Ⅱ、Ⅲ型慢性鼻窦炎鼻息肉术前组织中表达明显高于Ⅰ型组,P<0.05;TGF-β1在Ⅲ型表达明显高于Ⅰ、Ⅱ型组,P<0.01。
2.3TGF-β1在术后7天、1月、3月组组织中的表达依次递减,表达差异有意义,P<0.01。而且术前与术后7天比较,表达无差别;术前、术后7天与术后1月比较,表达有差别,P<0.01;术前、术后7天与术后3月比较,表达有差别,P<0.01;术后1月与术后3月比较,表达有差别,P<0.05。 2.4IL-1和IL-8在术后7天、1月、3月组织中的表达依次递减,表达差异有意义,P<0.05。而且术前与术后7天比较,表达无差别;术前、术后7天与术后1月、术后3月比较,表达有差别P<0.05术后1月与术后3月比较,表达无差别。
2.545例患者有7例术后组织持续水肿,息肉样变,该7例中IL-1、IL-8、TGF-β1的表达在术后7天、1月、3月组无差异,并且与术前比较无差异。
2.6IL-1、IL-8在慢性鼻窦炎鼻息肉中的表达正相关,P<0.01。IL-1、IL-8与TGF-β1表达无相关性。
结论:
1.术前与对照组比较,IL-1、IL-8、TGF-β1的表达显著高于对照组。IL-1、IL-8、TGF-β1可能与慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉发病有关;
2.慢性鼻.鼻窦炎鼻息肉术前与术后第7天组比较,组织中IL-1、IL-8、TGF-β1的表达差异无显著性意义。IL-1、IL-8、TGF-β1高表达与组织炎症程度有关;
3.术后7天、1月、3月组,随局部炎症减轻,组织中IL-1、IL-8、TGF-β1的表达依次递减,IL-1、IL-8、TGF-β1在组织中的表达降低也许可以作为疾病恢复的一个指标;
4.部分病例组织中IL-1、IL-8、TGF-β1的表达在术后7天、1月、3月组无差异,并且与术前比较无差异,提示鼻内镜术后复发与细胞因子持续高表达有关;
5.IL-1与IL-8在各组间表达的正相关。可能IL-1与IL-8在炎症反应中起协同作用。