论文部分内容阅读
白藜芦醇(Resveratrol,Res)是一种含有芪类结构的非黄酮类多酚化合物,广泛分布在虎杖、葡萄、花生等植物中,具有多种生理及药理活性。研究表明Res可具有抗炎、抗菌、抗氧化、抑制血小板聚集、降血脂等多种生物学功能。目前,Res被认为是一种很有潜力的肿瘤抑制剂,国内外在白血病、乳腺癌、肝癌、肺癌、大肠癌、卵巢癌等肿瘤中研究较多,但在宫颈癌中的研究少有报道。目的:研究不同浓度白藜芦醇对人宫颈癌Hela细胞体外生长的影响,并初步探讨其作用机制。方法:用不同浓度的白藜芦醇作用于人宫颈癌Hela细胞,通过MTT法来检测白藜芦醇对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响;采用细胞形态学观察及TdT酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL试剂盒)检测白藜芦醇对Hela细胞凋亡的影响;通过体外侵袭实验(transwell小室)检测白藜芦醇对Hela细胞侵袭能力的影响;通过Survivin,Caspase-3与β-catenin等蛋白的细胞免疫组化检测技术来初步探讨白藜芦醇对人宫颈癌Hela细胞的作用机制。结果:1、不同浓度白藜芦醇浓度对Hela细胞均有抑制作用。2、白藜芦醇在25μmol/L-100μmol/L范围内呈时间和剂量依赖。在100μmol/L已达到作用浓度平台期。3、50μmol/L及以上浓度的白藜芦醇对Hela细胞TUNEL实验染色观察,发现视野内Hela细胞有明显的凋亡阳性反应。随时间延长凋亡率增加。4、白藜芦醇处理Hela细胞后HE染色、吉姆萨染色法均以倒置显微镜观察到细胞凋亡的典型形态学特征,且随浓度增加凋亡细胞增加。5、白藜芦醇处理Hela细胞经免疫组化SABC法检测随着作用时间的延长上调Caspase-3蛋白表达,下调Survivin蛋白表达。6、通过体外侵袭实验(transwell小室)得出,12.5μmol/L浓度的白藜芦醇对Hela细胞即有一定的抑制侵袭作用。7、50μmol/L白藜芦醇处理Hela细胞免疫组化SABC法检测与对照组相比随着作用时间的延长β-catenin蛋白在细胞核及细胞浆核内表达减弱,细胞膜表达增强。结论:1、达到一定浓度的白藜芦醇就能够对人宫颈癌Hela细胞产生明显的抑制增殖作用,在一定浓度范围内呈时间剂量依赖。本实验中相对较低浓度的白藜芦醇抑制作用随时间的延长而渐渐明显,较高浓度的白藜芦醇12h之内就显示出强烈的抑制增殖作用,但24h-48h较12h-24h增殖抑制率的增加程度的有所减少。2、通过TUNEL检测法及对Res处理的Hela细胞形态的观察学也证实白藜芦醇在对Hela细胞在抑制其增殖的同时诱导其凋亡。Res对Hela细胞的凋亡作用很有可能是通过下调Survivin蛋白表达,上调Caspase-3蛋白的表达来诱导人宫颈癌Hela细胞的凋亡,从而抑制肿瘤的生长。3、本实验中低浓度的白藜芦醇即可抑制人宫颈癌Hela细胞的侵袭活性。其可能通过下调β-catenin蛋白在胞核及胞浆的表达,上调β-catenin蛋白在胞膜的表达来实现的。