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由大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)引起的茄子黄萎病是一种植物土传性质的维管束病害,它能引起起植物的叶片枯萎,最后导致植物死亡。关于黄萎病的致病机制,到目前为止还不完全了解。microRNA(miRNA)是一类长度约为22nt的非编码RNA,在植物的生长发育或胁迫反应中起着非常重要的调控作用。miR395是与植物营养硫缺陷胁迫有关的miRNA,而硫营养又与植物抗病虫害能力紧密相关。本论文以茄子miR395为研究对象,通过大丽轮枝菌胁迫下表达模式分析、在茄子中过表达分析、转基因茄子的抗病性分析以及相关生理生化指标分析,探究miR395在抗病中的作用。本研究得到的主要结果如下:1.miR395在大丽轮枝菌诱导下的表达模式。利用荧光定量qRT-PCR对miR395及其预测靶基因FS072237进行分析,结果显示,miR395成熟体基因随着侵染时间的延长是成逐渐下调趋势的,而其预测靶基因FS072237的表达呈逐渐上调趋势,与miR395的表达呈负相关,这表明miR395可能参与响应植物对黄萎病的防卫反应,也表明其预测靶基因可能是miR395真正靶基因。2.miR395前体基因的克隆、表达载体构建与茄子遗传转化。由于目前茄子的核酸序列库相对较小,通过生物信息学分析尚未在茄子中找到miR395前体序列,而miR395成熟序列在植物各物种之间序列保守,为了研究miR395在茄子黄萎病中的作用,我们采用PCR方法从拟南芥中克隆到了 miR395前体基因,并随后构建了过表达载体,接着将构建好的过表达载体转化到茄子"苏琦1号"品种(Solanum melongena L.cv.Suqi)中,通过PCR、qRT-PCR分析,鉴定得到4个过表达茄子株系。3.转miR395基因植株黄萎病的抗病性鉴定。采用大丽轮枝菌浸染方法处理转基因茄子植株,并以野生型作为对照,结果显示,与野生型对照相比,过表达miR395的转基因茄子植株对大丽轮枝菌的侵染变得更加敏感,无论病情指数还是发病率,过表达转基因株系,都明显高于对照植株。因为谷胱甘肽是硫转运的终端,检测了谷胱甘肽在转基因植株体内含量的变化,结果发现它在大丽轮枝菌的侵染下在植物体内呈早期明显上升,后期下降的趋势。这与小麦-白粉菌中GSH的变化一致。4.抗病相关的生理化指标分析。分别检测了超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化物酶(POD)活性,结果显示,在开始阶段转基因茄子体内SOD、POD含量较低,但随着黄萎病菌侵染,野生型体内各种酶的活性快速增加,其幅度高于转基因植株;说明,黄萎病菌胁迫可能激活了野生型体内活性氧清除系统,从而加快了某些防御物质(如木质素)的形成。最终把病菌侵染造成的危害降到最低,而转基因植株则对病菌更加敏感。