【摘 要】
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微藻通常是指含有叶绿素α并能进行光合作用的微生物(包括蓝细菌Cyanobacteria)。微藻作为一种新型的生物柴油原料,具有来源广泛、成本低廉、清洁可再生等优点,应用前景极为
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微藻通常是指含有叶绿素α并能进行光合作用的微生物(包括蓝细菌Cyanobacteria)。微藻作为一种新型的生物柴油原料,具有来源广泛、成本低廉、清洁可再生等优点,应用前景极为可观。筛选富油藻种、探索最佳培养条件以及利用生物技术获取高油脂基因工程微藻已成为国际普遍关注的研究课题。
热带地区丰富的藻种资源为筛选大量富油微藻提供了可能性,本实验分离纯化了71株热带水域微藻藻株,并通过形态学与分子生物学相结合的方法,对部分藻株进行了种属分类,为进一步对富油微藻进行生理生化分析、分子生物学及遗传学研究奠定了基础。
本实验通过尼罗红荧光染色的方法对微藻油脂进行定性及定量分析。优化了尼罗红荧光染色条件:尼罗红染料浓度0.5μg/ml、待测藻液浓度0D490=0.1-1.0、DMSO浓度20%以及染色时间10min。并为高通量筛选富油微藻提供了快速、灵敏、便捷的实验方法。
检测了3种小球藻在四种不同培养基(SE、BG11、TAP、DS-1)培养条件下的生长及油脂积累情况。结果表明,TAP培养基更适合小球藻的高密度培养,而DS培养基则更适合小球藻油脂的累积;并筛选到油脂积累较为理想的藻种Y-019。并制作了60L管状光生物反应器用于微藻的扩大化培养。
克隆了影响油脂合成代谢的关键基因Pepc2的部分片段,构建了Pepc2基因的RNAi表达载体,并通过玻璃珠法转化受体藻株莱茵衣藻Chlamydomonasreinhardtii(CC-124 wi1d type mt-)。采用荧光定量PCR方法分析了阳性转化株中Pepc2基因的转录水平,结果表明RNAi导致Pepc2基因较高水平沉默,转化株中目的基因表达量为对照组的10%~21%水平之间,降低了79%-90%;用尼罗红荧光染色方法分析转化株的含油量水平表明,与对照相比,Pepc2基因表达沉默的藻株含油量最高可提升23.4%。
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