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抗菌肽（Antimicrobial peptides）是一类具有抗菌活性的短肽，分子量在1000-7000左右，由12-50个氨基酸组成，具有广谱抗菌性，可杀死革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌等。抗菌肽ORBK是来源于无指盘臭蛙Odorrcma grahami皮肤分泌物的含16个氨基酸残基的阳离子多肽。该多肽是一类环形肽，不仅具有抗菌活性，还具有稳定的促胰岛素释放活性。目前获得抗菌肽ORBK的方法只有提取和合成，从无指盘臭蛙皮肤分泌物中提取，存在提取量少的瓶颈，而化学合成法成本较高，因为该多肽合成中还需要一个环化的过程。本论文利用基因工程结合H2O2氧化的方法，成功获得了抗菌肽ORBK，并对该抗菌肽的作用机制进行了探究，同时，还对抗结核杆菌蛋白D29P63和PK34进行了初步研究。 本论文的工作主要包括三部分: 1.抗菌肽ORBK的制备和分子机制研究。利用基因工程法把抗菌肽ORBK与融合蛋白MBP融合表达纯化，酶切后通过HPLC方法纯化出抗菌肽ORBK，之后利用H2O2氧化方法把线性抗菌肽ORBK中氧化为环化抗菌肽ORBK。 2.大多数抗菌肽的作用机制是破坏细胞膜的结构，引起细胞内容物大量渗透，最终导致细菌死亡。我们利用Nanodiscs和liposome体系对抗菌肽ORBK的作用机制进行了研究，研究表明抗菌肽ORBK作用于细菌细胞膜，并导致细菌细胞内容物泄漏，从而导致细菌死亡。 3.D29P63和PK34是D29分枝杆菌噬菌体来源的多肽。它们可作为制备抗结核杆菌药物制剂的应用，我们利用基因工程法成功获得了这两种多肽，并首次利用液体核磁共振技术完成了它们的主链原子化学位移的指认工作。