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背景:线粒体DNA4977bp缺失是机体老化的分子标志,已经证实存在于多种实体肿瘤中。喉鳞状细胞癌是头颈部最常见的恶性肿瘤之一,迄今为止,喉鳞状细胞癌(laryngealsquamouscellcarcinoma,LSCC)发病机理的研究尚无重大突破,缺乏早期诊断有效手段,而喉癌发病率及死亡率逐年上升,肿瘤的研究主要集中在核基因突变,近年来作为高等动物细胞内唯一的核外DNA——线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)突变在肿瘤发生中的作用逐渐受到关注,由于线粒体内高氧自由基(reactiveoxygenspecies,ROS),又缺乏有效修复系统及组蛋白保护,线粒体DNA极易受到损伤。人们发现线粒体DNA突变不仅与多种退化性疾病存在关系,而且在肿瘤的发病中也存在作用,一些学者提出线粒体致癌假说。
目的:本研究提取喉鳞状细胞癌患者四种组织来源标本基因组DNA,应用聚合酶链反应(Polymerasechainreaction,PCR)技术检测四种组织标本中线粒体DNA4977bp缺失突变情况,对比分析四种组织标本线粒体DNA4977bp缺失突变差异规律,预测线粒体DNA4977bp缺失突变在喉鳞状细胞癌发生发展中的作用,为寻找监测喉癌发生发展转移新肿瘤标志物、喉癌早发现、早诊断及提高喉癌中位生存时间开拓新的思路和新的方法。
方法:我们自2009年9月开始在中国人民解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科收集喉鳞状细胞癌患者临床病历资料,建立喉鳞状细胞癌资料数据库及患者外周抗凝血(peripheralanti-coagulationblood)、喉癌组织(Laryngealsquamouscellcarcinoma)、癌旁组织(Paracanceroustissue)及正常喉组织(normallaryngealtissues)四种术后病理标本,手术标本都是经过中国人民解放军总医院病理科医生病理诊断证实组织来源后所取得的,所有患者术前未接受放疗和(或)化疗,在该院诊断为原发性喉鳞状细胞癌患者。所有术后标本应用试剂盒提取基因组总DNA。以患者外周血作为实验对照组,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增线粒体DNA来检测线粒体大片段4977bp缺失,扩增的目的条带进行序列分析,应用序列比对软件与线粒体剑桥序列进行比对查找喉癌标本线粒体DNA突变情况,比较同一喉癌病人四份不同组织中线粒体DNA突变规律,以此分析推测线粒体DNA突变在喉癌发坐发展中的作用。
结果:我们收集了35例喉鳞状细胞癌患者的手术标本,共计140份。分析了线粒体DNA4977bp缺失情况,发现外周血液标本中未检测到现线粒体DNA4977bp缺失,癌组织中共检测到2例患者线粒体DNA4977bp缺失,癌旁组织中共检测到13例患者线粒体DNA4977bp缺失,正常组织中共检测到4位患者线粒体DNA4977bp缺失。通过四格表卡方检验统计分析我们发现:癌组织与癌旁组织比较卡方值x2为10.3,P<0.05,差异有统计学意义,癌旁组织与正常组织比较卡方值x2为6.29,P<0.05,差异有统计学意义,癌组织与正组织比较卡方值x2为0.73,P>0.05,差异无统计学意义。
结论:线粒体DNA4977bp缺失突变可能在喉鳞状细胞癌进展中存在某种作用,具体机制有待于进一步研究。