干扰素(Interferon，IFN)是一类具有抗病毒和免疫调节等作用的细胞因子。其中，Ⅱ型干扰素(又称作IFN-γ)是在抗原或有丝分裂原的刺激下，主要由活化的T淋巴细胞及NK细胞所产生，它影响机体的细胞免疫和体液免疫反应。为了了解鸡IFN-γ在抗病毒免疫应答中的作用及其机理，本研究进行了该基因的克隆、表达和鉴定。 　　首先，根据GenBank已登录的鸡IFN-γ序列，应用PrimerPremier5.0软件设计了一对引物，应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术，从经刀豆素A(ConA)诱导活化的鸡脾淋巴细胞总RNA中扩增得到一条特异性基因片段，其大小约为500bp。PCR产物分离纯化后将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上，经质粒PCR和EcoRI、SalI双酶切鉴定，筛选出阳性重组克隆后进行序列测定。 　　其次，对该序列及多种动物的IFN-γ运用计算机序列分析软件进行核苷酸和氨基酸序列的比较分析和遗传进化分析。基因进化树和氨基酸进化树分析表明：本研究所克隆的ChIFN-γ序列，无论从核苷酸水平还是氨基酸水平，与鸡形目和哺乳类动物的IFN-γ序列的进化关系均比鸡Ⅰ型干扰素近，同时经抗原性比较分析，鸡形目下IFN-γ的抗原性有较高的相似性。 　　最后，将重组表达质粒pGEX-4T-1-IFN-γ转化大肠杆菌BL21菌，经37℃和1.0mmol/LIPTG的诱导表达，SDS-PAGE凝胶电泳表明该基因在大肠杆菌中得到高效表达，且表达产物主要以包涵体的形式存在。融合蛋白的分子量约为43kD，与预期结果相符。 　　综上所述，本研究成功地克隆了鸡IFN-γ基因，构建原核表达质粒，并进行了原核蛋白的表达。本研究为了解各物种间干扰素序列的进化关系提供理论依据，同时也为进一步研究鸡IFN-γ重组蛋白的免疫学特性和生物学活性及其应用奠定基础。