[背景]近年来人们逐渐认识到心肌细胞的反复丢失是心力衰竭进程中最为重要的因素。而心肌细胞凋亡可能是其反复丢失的根源所在。同时因凋亡所致的心肌细胞死亡与病理性的心室重构密切相关。因此对由于凋亡所致的心肌细胞数量减少的研究,逐渐成为心力衰竭研究的热点。 细胞凋亡是受基因编码调控的。许多基因参与凋亡的调控,目前研究表明,Bcl-2基因直接抑制细胞凋亡。鉴于此,运用基因载体技术、基因转移技术将bcl-2基因导入衰竭的心肌,可直接抑制心肌细胞凋亡,减少心肌细胞丢失,提高心脏功能。 [方法]本课题根据文献采用腹主动脉结扎法制备了慢性心衰模型,将模型动物分为对照组及基因药物心肌注射后1d、3d、7d组。基因药物注射组用构建的In-vivo-jetPEI-pCAGGS-GFP-bcl2 DNA进行心肌转染,对照组注射等量的In vivo-jetPEI。采用激光共聚焦显微镜及抗体染色法观察心肌切片中GFP、Cy3荧光的表达,以二步免疫组化法检测Bcl—2基因蛋白的表达变化:以缺口末端标记法(TUNEL)标记凋亡细胞;用多道生理记录仪检测转染动物的心功能包括:心率(HR)、中心静脉压(CVP)、心输出量(CO)、左室舒张末压(LVEDP)等。 [结果] 1.带有GFP报告基因的Bcl-2基因药物,注射慢性心衰大鼠的心肌后,1天后取材,用激光共聚焦显微镜观察,能明显的看到GFP的表达,用Cy3二抗也能检测到GFP较高表达的丰度。