【摘 要】
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Neuromedin U 2受体(NMU2R)在调节摄食和体重方面发挥着重要作用,因此NMU2R的激动剂可能成为抵制肥胖的一种减肥药,但目前关于NMU2R的非内源性激动剂的报道很少,并且关于NMU2R的
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Neuromedin U 2受体(NMU2R)在调节摄食和体重方面发挥着重要作用,因此NMU2R的激动剂可能成为抵制肥胖的一种减肥药,但目前关于NMU2R的非内源性激动剂的报道很少,并且关于NMU2R的具体作用机制还未完全清楚。 本文利用NMU2R受体细胞株研究了NMU2R受体激动剂的活性,以及利用实时荧光定量PCR的方法检测了NMU2R参与调节摄食以及胰岛素敏感性方面的相关基因的变化。 1.NMU2R受体细胞株的建立 本文采用PCR技术从人基因组DNA中克隆出NMU2R全长cDNA,然后将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建NMU2R-pcDNA3.1真核表达载体。将NMU2R-pcDNA3.1载体和报告基因质粒共转染入HEK-293细胞中,得到稳定细胞株。利用CRE的激活剂Forskolin和NMU2R的内源性激动剂NMU检测细胞株的活性,荧光素酶报告基因表达量检测结果显示该细胞株对Forskolin和NMU都有较好的响应,呈剂量依赖关系。 2.NMU2R受体激动剂的活性分析 目前我们已经筛选出NMU2R的激动剂,经过结构分析发现它们同属于一大类化合物——黄酮类化合物。因此利用NMU2R稳定细胞株在体外检测这些化合物以及经过修饰的化合物的活性,比较其EC50。结果显示,化合物Mml-7与化合物Zsg-3具有较好的活性,其EC50分别是14.012μM和16.248μM,而利用该细胞株检测的NMU2R的内源性配体NMU的EC50为6.114μM。 3.EUK2010对食欲相关基因表达的影响 EUK2010是NMU2R的激动剂,实验证明它能够减轻大鼠或小鼠的体重。为了研究在NMU2R在调节体重和饮食方面的相关分子作用机制,将NMU2R的激动剂EUK2010灌喂小鼠,实时荧光定量PCR方法检测其下丘脑以及脂肪组织中与摄食相关的基因表达情况。结果显示,小鼠在灌喂EUK2010后,大量的调
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