论文部分内容阅读
目的皮肤损伤愈合是一个复杂的过程,包括止血、炎症、肉芽组织形成、上皮覆盖和最终的组织重建。Ⅰ型大麻素受体(cannabinoid receptor type 1, CB1R)为内源性大麻素系统(endocannabinoid system, ECs)的一个主要的成员之一,它是G蛋白偶连受体(G protein-coupled receptor, GPCR),它主要表达于中枢神经系统,同时也部分表达于外周器官,如肝脏、胃肠等。本研究用两种识别CB1R不同区域的多克隆抗体检测小鼠皮肤损伤愈合过程中CB1R的表达及变化情况,探讨CB1R在皮肤损伤愈合中的作用及其在损伤时间推断上应用的可能性。实验材料与方法健康成年清洁级昆明系小鼠50只,雄性,体质量35～40g,随机分为10组。其中皮肤切创分为9个时间段组,另一组为正常对照组,每组均为5只小鼠。乙醚气体吸入麻醉,背部剪毛处理后,常规手术消毒,在背部中央做一纵行长1.5cm皮肤全层切口,深达筋膜。每只小鼠分笼饲养,给予消毒饲料及自来水以预防感染。分别于伤后Oh,6h,12h, Id,3d,5d,7d, 10d和14d将小鼠脱颈椎处死,取伤口处1.5cm×1.0cm皮肤组织。正常对照组小鼠麻醉后背部剪毛,不做切创,观察至14d,脱颈椎处死,取相同部位同等大小皮肤,以备HE染色、免疫组织化学染色和Western blotting检测应用。应用免疫组织化学和Western blot技术检测50例小鼠皮肤切创后各时间段CB1R变化情况,以非切创小鼠皮肤组织作对照,显微镜x400倍下,在损伤区及损伤周边区随机选取10个视野,计数细胞总数、阳性细胞数及阳性细胞率。应用Fluochem V2.0软件检测各时间段的平均灰度值,测得数据用均数±标准差(x±s)表示。用SPSS13.0 for Windows进行单因素方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果正常小鼠皮肤的表皮、毛囊、皮脂腺及皮肌层中表达CB1R。皮肤切创伤后6h,多核粒细胞不表达CBIR。伤后12-24h,部分单个核细胞CB1R呈阳性。伤后l-3d, CB1R阳性细胞主要以单个核细胞和梭形成纤维细胞样细胞为主。伤后5-14d, CB1R表达主要在梭形成纤维细胞样细胞中。伤后Oh-ld, CB1R阳性细胞率逐渐增加。伤后3-5d呈高表达状态,5d达到高峰。伤后7d-14d, CB1R阳性细胞率逐渐下降。各组与相邻上组的细胞总数及阳性细胞率差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示正常皮肤内有CB1R阳性条带。皮肤切创后各时间段组CB1R表达强度有一定规律。伤后Oh-3d,阳性条带逐渐增强；伤后5d, CB1R达到高峰。伤后7d-14d,阳性条带依然较强,但呈下降趋势。除0h与正常对照组间平均灰度值差异无统计学意义外(P>0.05),其余各组间平均灰度值差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论1.正常小鼠皮肤的表皮、毛囊、皮脂腺及皮肌层中表达CB1R。2.小鼠皮肤切创愈合过程中单个核细胞和成纤维细胞表达CB1R,提示CB1R可能参与炎症反应和皮肤损伤后的愈合。3.小鼠皮肤切创愈合过程中CB1R表达的规律性变化可能用于皮肤切创损伤时间的推断。