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[目的]研究Sirt1-Stat3通路在DPSCs成骨分化中的调控作用,并探索Sirt1调控作用对DPSCs成骨分化效率的影响,为提高临床应用DPSCs进行组织工程学修复的效率提供理论依据。[方法]利用组织块加酶消化法分离原代牙髓干细胞,有限稀释法进行干细胞纯化,通过流式细胞术及干细胞多向诱导分化实验进行牙髓干细胞的鉴定。选择生长状态良好的第四代牙髓干细胞,对牙髓干细胞进行成骨诱导,以western blot方法检测细胞中的Sirtl及磷酸化Stat3的蛋白表达水平并进行比较及定量分析;加入Sirt1的激活剂及抑制剂提高和降低成骨诱导过程中Sirt1的蛋白活性,利用Western blot方法检测其中磷酸化Stat3的蛋白表达水平并进行比较及定量分析。选择生长状态良好的第四代牙髓干细胞,对牙髓干细胞进行成骨诱导,利用Sirt1的激活剂及抑制剂提高和降低成骨诱导过程中Sirt1的蛋白活性,利用Stat3抑制剂抑制成骨诱导过程中Stat3蛋白的磷酸化水平。在第7天和21天分别提取细胞总蛋白,利用Western blot方法检测各组磷酸化Stat3、成骨标记物骨调素和骨涎蛋白的表达水平,并进行比较及定量分析;在第7天和21天时分别对各组细胞进行ALP染色和von Kossa染色。[结果]我们成功获得了具有自我更新和多向分化能力、并能表达特异性表面抗原标记物的人牙髓干细胞。成骨诱导能够提高牙髓细胞中Sirt1的表达量,降低磷酸化Stat3的表达量。在牙髓干细胞成骨分化过程中,加入Sirt1的激活剂,磷酸化Stat3的表达量降低;加入Sirt1的抑制剂,磷酸化Stat3的表达量升高。所有加入了成骨诱导液的细胞组较培养基对照组细胞的Sirt1表达量增高,磷酸化Stat3表达量降低,骨调素和骨涎蛋白的表达量升高,ALP染色加深,钙化结节形成增多。但与单纯加入成骨诱导液的阳性对照组相比,加入Sirt1的激活剂以及Stat3的磷酸化抑制剂后,磷酸化Stat3的表达量降低,骨调素和骨涎蛋白的表达量升高,ALP染色加深,钙化结节形成增多;加入Sirt1的抑制剂后,磷酸化Stat3的表达量升高,骨调素和骨涎蛋白的表达量降低,ALP染色减弱,钙化结节形成减少。[结论]1.通过组织块加酶消化法,能够从健康牙髓组织中分离得到增殖活性和分化能力较强的牙髓干细胞。2.人牙髓干细胞成骨分化过程中,Sirt1的表达量提高,Stat3的磷酸化水平下降。3.在牙髓细胞中,Sirt1对Stat3具有调控作用,作用方式为Sirt1通过抑制Stat3的磷酸化抑制其活化进而抑制其发挥功能。4.Sirt1能够通过抑制Stat3的磷酸化促进牙髓干细胞的成骨分化过程。