论文部分内容阅读
自冷冻配子技术发明以来,大多数哺乳动物的冷冻精液技术得到了突飞猛进的发展,商品化效果较好。猪由于其精子抗冷冻打击能力差,冷冻精液的商品化效果不甚理想,目前多采用鲜精人工授精的方法。肉碱(Carnitine)自发现以来,因其在抗氧化方面的效果甚佳,目前多用于改善精子质量的各种药剂中,并在临床中取得了一定的效果。本试验意在探究肉碱对猪精子冻融后质量、精卵结合能力的影响,及其对精子凋亡因子Bax、Bc1-2、Caspase-3的mRNA表达水平和抗氧化酶SOD 2、CAT、GPx1的mRNA表达水平的影响。采用向冷冻液中添加不同浓度的肉碱,对精子进行冻融处理并检测鲜精及冻融后精子的各项生物学特性与脂质过氧化产物丙二醛(MDA)浓度及总抗氧化能力,以证明冻融后猪精子的质量大幅下降,及肉碱确实能够影响猪精子的冻存质量,并筛选出肉碱保护作用最强的添加浓度。对比鲜精组、无肉碱添加组及最佳浓度组的凋亡相关基因、抗氧化相关基因mRNA表达水平。用荧光染色技术对比鲜精组、无肉碱添加组及最佳浓度组的精卵结合情况。试验得到以下结果:1.冷冻液中添加不同浓度的肉碱(0、0.025、0.05、0.075 mg/ml)冻融后,各组精子活动率、质膜完整率、顶体膜完整率均低于最佳肉碱浓度组(0.05 mg/ml),各处理组间活动率、质膜完整性差异性均显著,除0.025及0.075 mg/ml处理组外各组间顶体膜完整性均差异显著(P<0.05)。各冻融组与鲜精相比,其MDA浓度均显著增加,其中最佳浓度处理组较其他各处理组MDA浓度最低,其余各处理组间差异不显著(P<0.05)。各冻融组与鲜精相比,其总抗氧化能力均显著降低,其中最佳浓度处理组较其他各处理组总抗氧化能力最高且与各处理组差异显著,其余处理组间差异不显著(P<0.05)。证明猪精子在冻融处理后确实质量下降,且肉碱对猪精子的冻存质量存在积极影响。2.与鲜精相比,冻融后精子中促凋亡相关基因mRNA表达水平显著增加,抗凋亡相关基因mRNA表达水平显著降低,抗氧化酶相关基因mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。与无肉碱添加组相比,最佳浓度组精子中促凋亡相关基因表达水平显著降低,抗凋亡相关基因mRNA显著增加,抗氧化酶相关基因含量显著增加(P<0.05)。3.使用鲜精、无肉碱添加组、最佳浓度组精子进行人工授精并使用荧光染色,结果显示鲜精组精子黏附数最多,最佳浓度组精子黏附数较少,无肉碱添加组精子黏附最少。结果显示,肉碱的添加可以有效降低冻融过程中精子受到的不利影响,提高精子的冻存质量。肉碱可影响精子冻存中的凋亡相关基因表达和抗氧化酶相关基因表达。肉碱可以改善冻存精子的精卵结合能力。