糖皮质激素诱导胸腺细胞凋亡的实验学研究

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目的:探讨糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)诱导胸腺细胞凋亡的形态学改变,以及凋亡相关蛋白bcl-2、bax对胸腺细胞凋亡的影响。   方法:4-6周龄雌性BALB/C小鼠腹腔注射地塞米松,采用原位标记(TUNEL)法检测DNA单链或双链的裂解,TUNEL和酸性磷酸酶双重染色法进行酸性磷酸酶(ACP)的检测,观察细胞凋亡后吞噬细胞的活动,透射电子显微镜检测凋亡细胞和吞噬细胞的超微结构,利用酶免疫电镜技术进行TUNEL阳性细胞的超微结构检测,采用免疫组化法检测凋亡相关蛋白bcl-2、bax的变化。   结果:光镜观察地塞米松组TUNEL阳性细胞较多并且分散在皮质各处。TUNEL和酸性磷酸酶双重染色法显示所有TUNEL阳性胸腺细胞都是被ACP阳性细胞吞噬的。透射电子显微镜观察发现死亡的胸腺细胞体积比较小,细胞核和细胞总体积均显著减少;皮质的巨噬细胞相对比较大,外形不规则并且通常具有皱缩的细胞膜,细胞核的常染色质位于周边,含有大量的吞噬小体。酶免疫电镜技术显示所有的TUNEL阳性胸腺细胞都已被巨噬细胞吞噬,未被吞噬细胞吞噬的胸腺细胞表现出大范围的染色质浓集。免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)结果表明,地塞米松组bcl-2基因蛋白呈低表达,对照组bcl-2基因蛋白呈高表达,与地塞米松组比较,差异有显著性(P<0.05);地塞米松组bax基因蛋白呈高表达,对照组bax基因蛋白呈低表达,与地塞米松组比较,差异有显著性(P<0.05);地塞米松组凋亡指数为0.460±0.008,对照组凋亡指数为0.020±0.001,与地塞米松组比较,差异有显著性(P<0.05)。   结论:典型的细胞凋亡的特点是DNA裂解,但这并不是糖皮质激素诱导胸腺细胞凋亡的主要方式,这些凋亡的胸腺细胞都是被ACP阳性细胞所吞噬的;糖皮质激素对胸腺细胞的首要的影响是可诱导没有DNA裂解的固缩;bcl-2和bax相互作用结合成二聚体影响糖皮质激素诱导的胸腺细胞的凋亡。
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