狂犬病（rabies）是由狂犬病病毒（Rabies virus,RABV）引起的致死性、高度嗜神经性人兽共患烈性传染病。目前尚无有效的治疗方案,免疫预防是防控该病的主要措施。因此,探究狂犬病病毒的复制与致病机理、研发廉价高效的疫苗尤为重要。密码子偏嗜性通过利用细胞内可用的tRNAs量的差异影响翻译过程,进而影响蛋白表达量。病毒密码子优化的研究近年已有较多报道,对水泡性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus,VSV）、脊髓灰质炎病毒（Poliovirus,PV）、禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）、人呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus,RSV）和1型HIV（Human immunodeficiency virus type 1）等病毒某些基因进行优化和反偏嗜性优化（去优化）后病毒的复制和致病性都发生了变化,而对于RABV的M基因优化的研究目前尚未见报道。本研究从以下几个方面对狂犬病病毒M基因反偏嗜性优化后病毒的复制与转录、致病性与免疫原性等方面进行探讨。本研究在实验室已经建立的狂犬病病毒反向遗传操作平台上,对携带双G基因重组病毒rHEP-dG的M基因进行反偏嗜性优化,增加病毒基因CpG和UpA二核苷酸的数量,构建重组全长cDNA质粒pHEP-dG-M^min,成功拯救出重组病毒rHEP-dG-M^min。对重组病毒rHEP-dG-M^min的生物学特性进行研究,结果显示,重组病毒rHEP-dG-M^min可以在NA细胞上稳定增殖。在MOI=3时,重组病毒rHEP-dG-M^min的病毒滴度高于rHEP-dG毒株;rHEP-dG-M^min感NA细胞24h后其病毒各基因的转录水平及病毒复制速度均高于亲本rHEP-dG;48h后r HEP-dG-M^min的G蛋白的表达量显著高于亲本rHEP-dG,其它结构蛋白的表达量无显著差异。当MOI=0.01时,病毒感染前48h重组病毒r HEP-dG-M^min的病毒滴度低于rHEP-dG毒株,而48h后病毒滴度高于rHEP-dG毒株,这也与病毒的扩散实验结果吻合;病毒rHEP-dG-M^min株的基因组RNA水平在72h内均低于亲本rHEP-dG,各基因的转录水平在感染早期低于亲本,感染48h后逐渐增高;蛋白表达量感染前期低于亲本,rHEP-dG-M^min株的M蛋白表达量在72h内均低于r HEP-dG毒株,其它结构蛋白感染48h后无显著差异。致病性实验结果显示,ICR小鼠肌注接种两重组病毒,r HEP-dG-M^min与亲本rHEP-dG对成鼠体重影响无显著差异,说明两毒株的致病性无显著差异。免疫原性结果显示,重组病毒rHEP-dG-M^min和rHEP-dG均能诱导小鼠产生狂犬抗体,监测10d时抗体水平已达到保护水平,但是监测50 d内抗体水平,发现两毒株产生的狂犬抗体水平无显著差异。攻毒实验结果说明rHEP-dG-M^min诱导的抗体水平对小鼠抵御CVS-24的攻击能力与rHEP-dG无显著差异,说明r HEP-dG-M^min的免疫保护力与rHEP-dG无显著差异。综上所述,反偏嗜性优化RABV的M基因,病毒的滴度升高,RABV的复制能力、转录水平和结构蛋白表达发生不同程度的变化。反偏嗜性优化后的重组病毒肌注接种ICR小鼠,其致病性、免疫原性及免疫保护力与亲本无显著差异。若要进一步研究重组狂犬病病毒rHEP-dG-M^min的应用,需以其它接种方式免疫KM系或BALB/C系小鼠探究重组病毒的致病性及免疫原性。