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新疆不仅是畜牧业大省,同时也是棉花种植大省。产量丰富的棉籽饼粕,蛋白质含量高,价格低廉,大量应用棉籽饼粕作为饲料来源,是解决新疆南疆绵羊饲料短缺的有效方法之一。然而,棉籽饼粕中含有棉酚,棉酚是一种细胞毒、血管毒、神经毒,可对绵羊机体造成损伤,从而制约了棉籽饼粕在养殖业中的应用。IL-8是一种能激活嗜中性粒细胞的趋化性细胞因子,对炎症和免疫反应具有重要的调节作用。为了了解棉酚对多浪羊损伤的过程中,IL-8对机体的免疫调节作用,本实验采取实时荧光定量PCR法测定不同浓度、不同时间的棉酚作用于多浪羊淋巴细胞后IL-8基因的表达量变化,以便用于更好地指导生产实践。以新疆多浪羊为研究对象,分离多浪羊的外周血淋巴细胞,以不同浓度（5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L、25μmol/L、30μmol/L、35μmol/L）的棉酚进行刺激,刺激时间1h、2h、3h、4h、8h,提取总RNA,采用实时荧光定量PCR检测IL-8基因的表达。结果表明,随着棉酚浓度的增加和作用时间的延长,IL-8的表达量先呈现出递增后迅速下降,棉酚作用浓度10μmol/L,作用时间2h时IL-8的基因表达量最高。为研究多浪羊淋巴细胞IL-8基因和蛋白表达的差异,构建了多浪羊pcDNA3.1-GFP-IL-8真核表达载体。本试验将获得的多浪羊淋巴细胞IL-8基因片段与pMD-l8T载体连接后,转化DH5a,获得pMD-18T-IL-8克隆,再采用酶切（BamHI、XhoI）法、PCR检测法对pMD-18T-IL-8进行鉴定。结果表明:成功构建了pMD-18T-IL-8原核表达载体。回收用BamHI、XhoI酶切的pMD-18T-IL-8和pcDNA3.1-GFP基因片段后,用T4DNA酶连接,转化DH5a,获得pcDNA3.1-GFP-IL-8克隆,再采用酶切（BamHI、XhoI）法、PCR法及序列测序进行鉴定。结果表明:成功构建了pcDNA3.1-GFP-IL-8真核表达载体,克隆出了IL-8的CDS区,序列长度315bp,经NCBI Blast比对分析,多浪羊与绵羊的IL-8序列一致性达到100%。进一步分离多浪羊外周血淋巴细胞,利用RPMI1640完全培养基进行培养。按照Lipofectamine?2000和pcDNA3.1-GFP、pcDNA3.1-GFP-IL-8质粒各5μL的比例加入到培养基中,混匀后继续培养24h,将pcDNA3.1-GFP和pcDNA3.1-GFP-IL-8分别转染至多浪羊淋巴细胞。按照如下分组,利用qPCR和Western blotting的方法检测多浪羊淋巴细胞IL-8的基因和蛋白质水平的表达量变化。A为淋巴细胞正常培养2h、B为用10μmol/L棉酚刺激淋巴细胞培养2h、C为pcDNA3.1-GFP转染至淋巴细胞后培养2h、D为pcDNA3.1-GFP转染至淋巴细胞后用10μmol/L棉酚刺激培养2h、E为pcDNA3.1-GFP-IL-8转染至淋巴细胞后培养2h、F为pcDNA3.1-GFP-IL-8转染至淋巴细胞后用10μmol/L棉酚刺激培养2h。qPCR检测IL-8基因的相对表达量和Western blotting检测IL-8的蛋白表达量结果为:pcDNA3.1-GFP-IL-8转染至淋巴细胞后用10μmol/L棉酚刺激培养2h后IL-8基因和蛋白的表达量大于10μmol/L棉酚刺激淋巴细胞培养2h后IL-8基因的表达量;pcDNA3.1-GFP-IL-8转染至淋巴细胞后用10μmol/L棉酚刺激培养2h后IL-8基因和蛋白的表达量大于pcDNA3.1-GFP-IL-8转染至淋巴细胞后培养2h后的IL-8基因的表达量。说明了10μmol/L的棉酚刺激淋巴细胞2h,多浪羊淋巴细胞IL-8的基因和蛋白表达量均升高。该研究结果为揭示棉酚刺激下IL-8的免疫学功能奠定基础。