猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是目前造成养猪业严重经济损失的重要病原,在临床上可引起怀孕母猪的繁殖障碍及断奶仔猪肺炎。PRRSV属于动脉炎病毒科,为单股、正链RNA病毒。PRRSV ORF7基因的表达产物—核衣壳蛋白(N蛋白)具有良好的免疫原性,病毒感染后机体最先产生针对N蛋白的抗体并可在体内持续存在长达一年以上。本研究利用原核表达的N蛋白,建立检测PRRSV血清抗体的iELISA方法,为研究PRRSV感染的诊断和致病机理研究创造了条件。对原核表达N蛋白的重组菌pGEX-6p-1-N/BL21进行诱导,通过谷胱甘肽琼脂糖树脂亲和层析方法对重组蛋白进行纯化,得到重组N蛋白的浓度为0.557mg/mL。应用纯化的重组N蛋白作为包被抗原,经过优化ELISA反应中各种反应物的最佳工作参数,初步建立了检测血清中PRRSV抗体的iELISA方法:重组N蛋白包被量为174ng/100μL,4℃过夜,10%犊牛血清PBST封闭37℃2h;待检血清40倍稀释,37℃作用30min;兔抗猪酶标抗体1:640稀释50μL/孔,37℃作用30min;TMB显色后硫酸终止,OD450读数。对已知背景的127份阴性血清和55份阳性血清的检测并应用TG-ROC软件对所得结果进行分析,确定了反应的临界值以及中间区域。应用建立的iELISA方法与国外进口的PRRS检测试剂盒IDEXX-ELISA对220份临床血清样品进行平行检测,得出二者的阳性符合率为94.8%,阴性符合率为81.5%,总符合率达到84.6%,表明所建立的iELISA具有较高的特异性和敏感性。