目的利用H9C2心肌细胞,建立缺氧复氧（hypoxia-reoxygenation,HR）损伤模型,明确线粒体未折叠蛋白反应(mitochondrial unfolded protein response,UPRmt)被激活以及UCP2在心肌细胞缺氧复氧损伤中保护效应。进一步探究UCP2通过去乙酰化酶3（Sirtuin-3,SIRT3）调控UPRmt发挥心肌线粒体保护作用机制,为UCP2发挥心肌线粒体保护性研究开拓新的思路。方法1 HR损伤模型摸索H9C2心肌细胞培养48小时后,细胞融合度达80%左右即可进行HR损伤处理。检测心肌细胞中UPRmt标志蛋白:热休克蛋白10（Heat shock protein10,HSP10）、热休克蛋白60（Heat shock protein 60,HSP60）、线粒体ATP依赖的LON蛋白水解酶1（Lon protease 1,LONP1）、线粒体酪蛋白水解酶P（Casein hydrolyzed protese P,CLPP）的蛋白表达水平探究UPRmt是否被激活,以及摸索本实验合适的HR损伤模型时间。2心肌细胞损伤及线粒体损伤评价CCK-8（Cell Counting Kit-8）检测心肌细胞活力;用二氢乙啶（Dihydroethidium,DHE）荧光探针检测活性氧（Reactive oxygen species,ROS）;用JC-1探针检测线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,（?）Ψm）;用三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate,ATP）检测试剂盒测定ATP含量,电镜下观察线粒体超微结构。3线粒体未折叠蛋白反应标志蛋白检测利用Western blot检测HSP10、HSP60、LONP1、CLPP蛋白表达。结果1 HR损伤诱导了H9C2心肌细胞UPRmt的发生将细胞进行HR处理后检测发现,与常氧（Normal,N）组相比,在缺氧3h复氧0.5h时,UPRmt标志蛋白（HSP10、HSP60、LONP1、CLPP）表达水平明显增高。同时,细胞活力明显下降,ROS的产生明显增多,（?）Ψm明显下降（均p＜0.05）。说明心肌细胞HR处理影响了UPRmt,即HR损伤可诱导H9C2心肌细胞UPRmt的发生。2 UCP2过表达参与调节UPRmt,改善H9C2心肌细胞线粒体结构及功能UCP2过表达后再HR处理,与HR组相比,ROS产量减少,（?）Ψm增高,细胞ATP产量也增加,HSP10、HSP60、LONP1、CLPP蛋白表达水平明显增高（均p＜0.05）。比较于HR组,UCP2沉默+HR组,ROS含量明显增高,（?）Ψm丢失更加明显,ATP产量明显减少,HSP10、HSP60、LONP1、CLPP蛋白表达水平明显降低（均p＜0.05）。3 UCP2过表达通过激活SIRT3调节UPRmt,发挥H9C2心肌细胞线粒体保护作用将H9C2心肌细胞进行SIRT3过表达后再HR处理,与单纯HR处理组相比,ROS产量明显减少,（?）Ψm得到一定程度的恢复,ATP产量也有所增高,HSP10、HSP60、LONP1、CLPP蛋白表达水平明显增高（均p＜0.05）。而将SIRT3沉默组再HR处理,对比单纯HR处理,ROS增多,（?）Ψm进一步丢失,ATP的含量也减少,HSP10、HSP60、LONP1、CLPP表达也明显降低（均p＜0.05）。当SIRT3沉默后过表达UCP2再进行HR处理,比较于SIRT3沉默后再HR处理,ROS产量、（?）Ψm的丢失和ATP的产量,HSP10、HSP60、LONP1、CLPP蛋白表达水平并未得到明显的逆转（均p＞0.05）。结论HR损伤诱导了H9C2心肌细胞UPRmt的发生;UCP2过表达参与调节UPRmt,改善H9C2心肌细胞线粒体结构及功能;UCP2过表达通过激活SIRT3调节UPRmt,发挥H9C2心肌细胞线粒体保护作用。