论文部分内容阅读
本文旨在分离人血红蛋白及其片段，进行体外抗菌活性检测和比较，并对血红蛋白抗大肠埃希菌阴道感染作用进行初步探讨，为血红蛋白将来的应用打下基础。本文分为两部分：第一部分：人血红蛋白片段分离纯化及体外抗菌活性比较。目的：分离纯化成人血红蛋白肽链片段及比较其体外抗菌活性。方法：取志愿者新鲜外周血或库存血，二氯甲烷裂解红细胞，差速离心分离血红蛋白；利用阳离子交换及分子筛分离血红蛋白α、β链；溴化氰化学法裂解血红蛋白肽链，反相高效液相色谱技术纯化其片段。Tricine SDS-PAGE检测各分离阶段目的分子的纯度、分子量；琼脂糖弥散法抑菌试验检测得到的血红蛋白及其片段的抑菌活性。结果：血液差速离心分离的血红蛋白经层析得到α链和β链；溴化氰裂解、反相高效液相色谱制备了α链的α1～32(约3KD)、α77～141(约7KD)两个片段；β链的β56～146(约10KD)一个片段。除α1～32外，血红蛋白、α链、β链、及α77～141对革兰阴性菌大肠埃希菌标准株ATCC25922和临床分离株54080有强的抑菌作用，而对铜绿假单胞菌标准株ATCC 27853和铜绿假单胞菌临床分离株PA01以及革兰阳性菌金黄色葡萄球菌标准株ATCC25923、真菌白色念株菌标准株ATCC10231无抑菌作用，而β56～146不仅对所选大肠埃希菌有强抗菌作用外，而且对铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌有弱的抑菌作用，但对白色念株菌无抑菌作用。结论：血红蛋白、α／β链及其片段有抑菌作用，但其主要针对的是革兰阴性菌大肠埃希菌；而且除α1～32的抑菌作用较弱外，血红蛋白、α／β链及其片段三者抑菌活性比较，其效能基本相似。第二部分：人血红蛋白抗大鼠大肠埃希菌阴道感染研究。目的：检测人血红蛋白在体内的抗感染作用。方法：手术切除大鼠双侧卵巢，皮下注射苯甲酸雌二醇建立和维持动情期，氢化可的松琥珀酸钠造成大鼠全身免疫力低下，PBS反复冲洗大鼠阴道后将大肠埃希菌临床分离株接种到大鼠阴道内。感染成功后设立实验组和对照组，采用阴道给血红蛋白，观察子宫宫颈阴道脏器指数和组织病理切片检测血红蛋白治疗前后各组指标变化。结果：子宫宫颈阴道脏器指数经统计学分析示血红蛋白组(实验组)、空白对照组间无差异(P＞0．05)，基质对照组(感染后不治疗)与前两组比均有显著性差异(P＜0．05)，基质对照组的脏器指数增加明显；血红蛋白组的炎症减轻程度为57％，与基质对照组对比统计学上有显著性差异。结论：血红蛋白不仅具有体外的抑菌功能，而且在体内能够减轻大鼠大肠埃希菌阴道感染炎症病变程度。