中毒量的氯化琥珀胆碱在大鼠体内的分布及其中间代谢产物测定的研究

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背景:氯化琥珀胆碱(Suc)临床上是给病人做全身麻醉时用的肌肉松弛剂。若超量注射该药或不配合使用呼吸机,可致人心搏骤停,呼吸麻痹直至死亡,曾属于B级有机剧毒品。近年来,Suc被不法分子应用于飞镖射杀家禽、家畜类动物,甚至被犯罪分子用作杀人工具。Suc可在丁酰胆碱酯酶的作用下快速分解成肌松作用很弱的琥珀酰单胆碱(Smc),随后在该酶作用下继续被代谢成无肌松作用的琥珀酸和胆碱。只有约2%的原形药物存在体内,而这两种分解物在体内本是存在的,这给Suc致死的检验又增加了难度。因此,Suc的法医学检验成为当今司法实践中的一个新问题。在司法鉴定实践中,快速准确地对生物样品中的Suc进行定性和定量分析,将会为案件的侦破提供有利的帮助。根据文献和资料显示:Suc为季铵型化合物,高温不够稳定,在电喷雾质谱中离子化效率较高,而超高效液相色谱-质谱法(UHPLC-MS/MS)可有效分析高极性和热不稳定的化合物,该方法检测限低,重现性好,方法准确可靠,也排除了生物基质的干扰,适用于Suc的检测。目的:建立适当的UHPLC-MS/MS法,对中毒致死大鼠体内高含量组织器官的Suc及其代谢产物进行定性定量分析,以期为法医学诊断Suc中毒案件提供参考和发挥威慑犯罪的社会作用。方法:质谱采用三重四极杆串联质谱仪,电喷雾离子源(ESI),正离子扫描下多反应监测(MRM),确定Suc母离子为145.1(m/z),子离子有115.4(m/z)和93.3(m/z),前者定量,后者定性;氘代氯化琥珀胆碱(2H-Suc)的母离子是148.1(m/z),子离子有117.1(m/z)和95.1(m/z),前者定量,后者定性;Suc的代谢产物Smc母离子为204.0(m/z),子离子有106(m/z)和85.2(m/z),前者定性,后者定量。色谱采用Luna NH2色谱柱(2 mm×100 mm,3μm),超高压液相色谱仪,流动相A为0.1%的甲酸水溶液,流动相B为100%乙腈,流速是0.2 m L·min-1,梯度洗脱条件为5 min,等度洗脱,柱温为37℃。采用上述条件建立UHPLC-MS/MS方法,先进行大鼠皮下注射2H-Suc的体内示踪实验,然后大鼠分别皮下注射三种剂量的Suc,4 h后取大鼠血清和各主要脏器组织进行乙腈蛋白沉淀并过固相萃取WCX柱进行纯化,过0.22μm有机滤膜,上样,使用UHPLC-MS/MS仪器进行Suc和代谢物的检测。本研究使用离体血管直径压力测定仪进行血管实验,测定Suc对血管功能的影响。结果:建立了2H-Suc的超高效液相色谱串联质谱(UHPLC-MS/MS)检测方法,进行了皮下注射2H-Suc的大鼠体内示踪研究,确定了Suc在大鼠体内分布的主要脏器;建立了检测Suc的UHPLC-MS/MS方法,Suc的检测限是0.01 ng·m L-1,回收率为89.5%~95.4%,日内、日间相对标准偏差(RSD)均小于15%,大鼠皮下注射0.75、1.5和3.0 mg/kg的Suc,在血清及心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、肠和肌肉等组织中均检测到了Suc,其中肾组织中Suc含量最高,各组织的含量与给药剂量呈正相关;在给药大鼠体内检测到了Suc代谢产物之一的Smc;Suc可明显地减弱KCL诱导的大鼠脑基底动脉收缩和乙酰胆碱(ACh)诱导的舒张反应。结论:大鼠Suc中毒时在血清及心、肝、肾等组织中均有分布,其中肾脏中含量最高;UHPLC-MS/MS法是检测Suc中毒大鼠体内药量的一个有效、可靠的方法;将Smc作为Suc致死大鼠体内检测的一种方法,能够使检出率和准确率提高;可以通过血管收缩和舒张反应辅助判断Suc的中毒案件。
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