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在全球范围内,食管癌的高发地区包括:中国（21/100,000人）,日本（9/100,000人）,南美（13/100,000人）,南非（10/100,000人）,前苏联地区（8/100,000人）及西欧（11/100,000人）。食管癌是我国常见的消化道恶性肿瘤,我国大部分地区食管癌的发病率均较低,但在河南、山西及河北三省交界的太行山南侧地区,其发病率高达100/100,000以上。近年来食管癌的危险因素得到有效的干预,河南省的食管癌发病率和死亡率均已显著下降,但仍然显著高于世界平均水平。食管癌患者的预后很差,五年生存率还不到15%,因此,早诊早治以提高食管癌患者的五年生存率,已经成为目前研究的重要课题。我国的研究者对食管癌进行了长期的研究,并取得显著的成绩。提出环境因素和个人的遗传因素对食管癌发生和发展可能起着重要作用。食管癌与其他癌症一样,是一种很复杂的疾病,其发生和发展是致癌物的激活和灭活、DNA的损伤与修复及细胞的增殖与凋亡等一系列因素综合作用的结果。CCN家族由一组具有高度序列同源性的多种因子组成,其中包括结缔组织生长因子（CTGF）、半胱氨酸富集蛋白61（Cyr61）、肾母细胞瘤过度表达蛋白（NOV）及Wnt-1诱导信号通路蛋白（WISP）-1,2,3。它们不仅参与正常机体细胞的生长调控,而且与肿瘤细胞生长有密切关系。WISP3位于6q21-22,编码354个氨基酸残基的相对分子量为35000-40000的分泌蛋白。关于WISP3与食管癌的关系研究还比较少。目的分析WISP3 mRNA及蛋白的表达水平与临床及病理等相关因素关系,并对食管癌患者进行跟踪随访,以研究WISP3基因及其它相关因素对病人预后的影响。材料与方法1.研究对象的选择、组织样本的采集及临床及病理等相关因素的收集选取2004年至2007年在郑州大学第一附属医院和林州市肿瘤医院就医的食管癌患者作为本研究的研究对象,采集患者手术后食管癌癌组织及其匹配的正常食管组织标本186对。所有标本均经病理学鉴定。标本离体后30分钟内放入液氮中,后转移到-80℃冰箱中保存。收集患者的年龄、性别、肿瘤大小、家族史、肿瘤的位置、肿瘤的分化程度以及患者是否有淋巴结转移等相关因素的资料,以用于统计学分析,研究其临床意义。2.组织中WISP3 mRNA表达水平的测定采用荧光定量PCR方法测定食管癌患者癌组织及匹配的癌旁正常组织中WISP3基因mRNA的表达水平,以β-actin作为内参基因。通过测定样本中目的基因模板的Ct值即循环阈值来反映模板的含量。对每一个组织样本,用Δt(CtWISP3-Ctβ-actin)值表示目的基因与内参基因β-actin间Ct的差值,Δ（ΔCt）值等于ΔCt（正常食管组织）——ΔCt（食管癌组织）。3.样本中WISP3蛋白表达水平的测定通过免疫组织化学染色法测定186例食管癌患者癌组织及其匹配的癌旁正常组织中WISP3蛋白表达水平,每一标本在200倍显微镜下观察3个染色最强的视野,并记数阳性细胞数,计算阳性细胞百分比,并计算每位研究对象的食管癌组织中阳性细胞百分比与匹配的正常食管组织中阳性细胞百分比的比值,以此比值作为判断该患者蛋白表达水平指标。4.生存分析资料的收集2008年3月-4月期间,我们对采集标本的食管癌患者进行跟踪随访。以患者手术治疗时刻作为生存的起始事件,死亡为终点事件,随访结束时间作为观察终止时间。起始事件与终点事件之间的间隔时间定义为研究对象的生存时间。5.统计学分析运用SPSS12.0统计分析软件对数据进行分析,采用χ2检验比较186例食管癌患者组织中的WISP3基因mRNA和蛋白的表达水平及其与临床及病理等相关因素的关系,绘出WISP3基因的表达阳性与阴性的食管癌患者Kaplan-Meier生存曲线,采用时序检验（log-rank）来比较WISP3基因的表达阳性与阴性的两条曲线的差异。采用比例危险率回归模型（Cox回归）分析临床参数与基因表达对生存的影响。以α=0.05作为检验水准。结果1荧光定量PCR结果1.1 WISP3基因在食管癌组织中及匹配的正常食管组织中的mRNA表达水平荧光定量PCR结果显示,与匹配正常食管组织相比,在186例样品中,WISP3在128（68%）例食管癌组织中的表达上调。单因素的分析表明,食管癌组织与匹配正常食管组织中WISP3基因mRNA的表达水平差异有统计学意义（t=7.641,P=0.001）。1.2 WISP3基因在食管癌组织中的表达水平与临床及病理等相关因素之间的关系WISP3 mRNA的表达与食管癌患者的一些相关因素有关,包括是否吸烟、淋巴结转移、家族史、浸润深度、肿瘤体积、肿瘤分化程度。吸烟患者WISP3 mRNA的表达水平显著高于不吸烟者（P=0.007）;淋巴结转移组WISP3 mRNA表达水平显著高于淋巴结未转移组（P=0.001）;有家族史的患者WISP3 mRNA的表达水平显著高于没有家族史的表达水平（P=0.031）。浸润越深,WISP3mRNA的表达越高（P=0.001）;肿瘤分化程度越低,WISP3mRNA的表达水平越高（P=0.008）;不同肿瘤体积间WISP3 mRNA表达水平存在差异（P=0.001）,肿瘤体积越大,食管癌组织中WISP3表达水平越高;不同位置的肿瘤WISP3表达水平也不相同（P=0.078）;而性别、年龄与病理类型则与WISP3 mRNA的表达水平没有关系。2免疫组化结果2.1 WISP3蛋白在食管癌组织中与匹配正常食管组织中的表达与匹配正常食管组织相比,WISP3蛋白在120（65%）例食管癌组织中的表达上调。配对t检验结果显示,WISP3蛋白在食管癌组织中表达水平均显著高于其匹配正常食管癌组织（P=0.001）,与荧光定量PCR结果一致。2.2WISP3蛋白在食管癌组织中的表达与相关因素之间的关系WISP3蛋白的表达水平与食管癌患者的一些临床及生活习惯等因素相关,包括吸烟,淋巴结转移,家族史,浸润深度,分化程度。吸烟患者WISP3蛋白表达水平显著高于不吸烟者（P=0.001）;淋巴结转移组WISP3蛋白表达水平显著高于淋巴结未转移组（P=0.037）;有家族史的患者WISP3蛋白表达水平显著高于没有家族史者（P=0.002）;肿瘤分化程度越低,WISP3蛋白的表达水平越高（P=0.038）。而性别、年龄、肿瘤体积、肿瘤位置与病理类型则与WISP3蛋白表达水平没有关系。3.生存分析多因素生存分析（Cox回归分析）表明,影响食管癌患者生存率的独立危险因素是WISP3蛋白表达、家族史和淋巴结转移,相对危险度分别是1.277（95%CI1.080～1.509）、1.692（95%CI 1.067～2.683）、2.009（95%CI 1.176～3.433）。结论1.食管癌组织WISP3 mRNA表达水平显著高于其匹配正常食管组织。WISP3 mRNA的表达与食管癌的一些临床参数高度相关,包括是否吸烟,淋巴结转移,家族史,浸润深度,肿瘤体积,肿瘤分期。而性别、年龄、是否吸烟、家族史与病理类型则与WISP3 mRNA的表达没有关系。2.WISP3蛋白在食管癌组织中表达水平均显著高于匹配正常食管癌组织。WISP3蛋白的表达与食管癌的一些临床参数高度相关,包括吸烟,淋巴结转移,家族史,浸润深度,分化程度。而性别、年龄、肿瘤体积、肿瘤位置与病理类型则与WISP3蛋白表达水平没有关系。3.食管癌组织WISP3高表达患者的平均生存时间显著低于WISP3低表达的患者,Cox回归分析显示:影响食管癌患者生存率的独立危险因素是WISP3蛋白表达、家族史和淋巴结转移。4.WISP3在食管癌组织的表达高于正常食管组织,这种基因的高表达可能与食管癌的发生、发展及转移有着密切的关系。因此WISP3可作为食管癌患者术后预后的一个评价指标,并可能成为基因治疗的一个作用靶点。