Tremor大鼠海马锌水平、两种锌转运体表达及苔藓纤维发芽现象的研究

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癫痫是中枢神经系统的常见病,许多研究表明癫痫发作与脑内锌稳态的改变有关。锌转运体对维持细胞锌稳态具有重要作用。锌转运体1(ZnT-1)定位于胞浆膜上。体内体外实验均证明细胞锌水平与ZnT-1表达之间存在因果关系。脑中锌转运体3(ZnT-3)蛋白在海马的苔藓纤维中含量最高。苔藓纤维突触囊泡锌水平由其膜上ZnT-3的表达量决定。本研究通过对一种遗传性癫痫小发作动物模型—震颤大鼠(tremor rat)海马锌元素水平及两种锌转运体(ZnT-1和ZnT-3)的表达情况进行分析为探讨癫痫小发作与脑内锌稳态改变的关系提供实验依据。海马内苔藓纤维发芽(mossy fiber sprouting,MFS)和神经元缺失是癫痫时普遍存在的病理现象,它与癫痫的反复自发性发作密切相关。海马内苔藓纤维发芽是癫痫研究中重要的领域。本研究对于tremor大鼠海马齿状回和CA3区是否存在苔藓纤维发芽现象进行观察分析。材料与方法1、实验动物:tremor大鼠、野生型大鼠(wild type control rat,WTC rat)、正常Wistar大鼠各24只,均为10周龄。2、提取大鼠DNA,以突变tm基因特异性引物进行PCR扩增鉴定tremor大鼠和WTC大鼠。3、应用原子吸收光谱法检测tremor大鼠、WTC大鼠及正常Wistar大鼠海马锌元素水平。4、提取大鼠海马组织膜蛋白,用半定量Western blotting的方法研究tremor大鼠、WTC大鼠及正常Wistar大鼠海马锌转运体1和3蛋白的相对表达情况。5、提取大鼠海马组织RNA,用半定量RT-PCR的方法研究tremor大鼠、WTC大鼠及正常Wistar大鼠海马锌转运体1mRNA相对表达情况。6、应用锌金属自显影(ZnSeAMG)技术观察tremor大鼠、WTC大鼠及正常Wistar大鼠海马苔藓纤维发芽现象。实验结果1、基因鉴定结果:有阳性扩增产物(片段长度为197bp)的大鼠为tremor大鼠。2、反复癫痫小发作的tremor大鼠海马锌元素水平明显高于WTC大鼠(p<0.05)及正常Wistar大鼠(p<0.05);WTC大鼠与正常Wistar大鼠海马锌元素水平无明显差异(p>0.05)。3、反复癫痫小发作的tremor大鼠海马锌转运体1蛋白表达明显高于WTC大鼠(p<0.05)及正常Wistar大鼠(p<0.05);WTC大鼠与正常Wistar大鼠海马锌转运体1蛋白表达无明显差异(p>0.05)。三组大鼠海马锌转运体3蛋白表达无明显差异(p>0.05)。4、反复癫痫小发作的tremor大鼠海马锌转运体1 mRNA表达明显高于WTC大鼠(p<0.05)及正常Wistar大鼠(p<0.05);WTC大鼠与正常Wistar大鼠海马锌转运体1 mRNA表达无明显差异(p>0.05)。5、反复癫痫小发作的tremor大鼠海马的齿状回和CA3区苔藓纤维发芽评分明显高于WTC大鼠组(p<0.05)及正常Wistar大鼠(p<0.05);WTC大鼠与正常Wistar大鼠海马的齿状回和CA3区苔藓纤维发芽评分无明显差异(p>0.05)。结论1、反复癫痫小发作的tremor大鼠海马锌元素水平增高。2、反复癫痫小发作的tremor大鼠海马锌转运体1蛋白及mRNA表达增多,而锌转运体3表达没有发生改变。3、反复癫痫小发作的tremor大鼠海马齿状回和CA3区存在苔藓纤维发芽现象。
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