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研究目的:通过观察外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclea cells,PBMCs)在体外分泌细胞因子的特点,和在LPS刺激以后细胞因子分泌水平的变化,初步探讨LPS、PBMCs以及细胞因子在PBC发病机制中的作用。
研究方法:
采集21例PBC患者,8例原发性干燥综合征(Primary Sjogren’s Syndrome,PSS)患者,11例健康成人的抗凝静脉血,分离PBMCs;除其中9例PBC患者的PBMCs为冻存复苏外,其余标本均为新鲜采集。将所得细胞分别置于RPMl1640完全培养基中和含有终浓度为0.01mg/ml LPS的RPMl1640完全培养基中培养24小时,收集上清液,用ELISA方法测量其中细胞因子的浓度。用新鲜采集的6例PBC患者和3例正常人PBMCs,分别给予浓度为0.01mg/ml、0.1mg/ml和1mg/ml LPS的刺激,于12、24和48小时收集上清液,用ELISA方法检测IFN-γ。
研究结果:
在无刺激体外培养24小时的PBMCs上清液中,PBC患者组的IL-1β、IL-2、IL-6和TNF-α的水平都有高于正常对照组的趋势;其中IL-2的升高有统计学显著性意义(p<0.05)。在0.01mg/ml LPS体外培养24小时的PBMCs上清液中,PBC患者组的IL-1β、IL-2和TNF-α的水平都明显高于正常对照组(p<0.05)。从变化幅度比较,PBC患者IL-1β升高幅度明显高于正常对照组(p<0.05),IL-2的降低幅度与正常对照有显著性差异(p<0.05)。PBC组与PSS组比较,仅0.01mg/ml LPS刺激后的IL-6水平有明显升高(p<0.05)。IFN-γ在PBMCs上清液中几乎检测不到。新鲜提取的PBMCs和液氮冻存后复苏的PBMCs相比,在体外对LPS刺激的反应有明显的差异。
结论:
PBC患者的PBMCs在体外无刺激条件下,和受LPS刺激后,分泌细胞因子的特点与正常对照组之间存在差异。液氮冻存的PBMCs细胞复苏后的活性与新鲜提取的PBMCs有明显差异。