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本研究利用杂交瘤技术研制出氯霉素单克隆抗体,建立了氯霉素快速检测方法,并在食品安全检测中得到初步应用。
本研究分别采用羰基二咪唑法和戊二醛法将氯霉素偶联到蛋白载体上,制备出BSA-CAP和OVA-CAP,分别作为免疫抗原和包被抗原。用BSA-CAP免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞SP2/0作融合实验,筛选出 6株能稳定产生氯霉素抗体的杂交瘤细胞株,并制备出单克隆抗体,经鉴定6株单抗亚型均为IgG1,效价在1:107~1:109之间。
设计了直接竞争ELISA检测方法,并对包被条件、包被浓度、竞争反应时间等条件进行了优化,建立了完整的ELISA检测方案。该方法的检测时间在1.5h之内,最低检测限为0.05ng/ml,I50为0.9ng/ml,与其他几种抗生素的交叉反应均小于0.1%,优于国家现有氯霉素残留限量的检测要求。
同时建立了检测氯霉素的胶体金免疫层析方法。采用免疫竞争法,将抗氯霉素单克隆抗体-胶体金结合物包被在胶体金结合垫上,将人工合成的氯霉素抗原包被在NC膜上作为检测线,其与待测样品中氯霉素竞争结合胶体金标记的氯霉素单克隆抗体,并以颜色直观显示检测结果。经实验验证,灵敏度最低检测值为2.5ng/ml,尽管其灵敏度尚不能达到国标要求,但其检测时间只需10min,与其他几种抗生素没有交叉反应,可以满足现场初筛的需求。
本研究建立了一种快速检测食品中抗生素有害残留的技术方法,可为其他有害物质的检测提供技术借鉴,对食品安全监控提供技术支持。