论文部分内容阅读
研究背景近年来,大量的研究表明动脉粥样硬化是一种慢性炎症性病理过程。动脉粥样硬化病变中不仅含有大量的脂质,而且有大量的炎症细胞浸润,并以单核/巨噬细胞和淋巴细胞的集聚为特征。动脉粥样硬化发生、发展中,这些炎症细胞可分泌大量的炎症因子,参与调节细胞的增殖或凋亡、细胞外基质的合成或降解以及血管的重塑等过程。PCSK9是2003年应用生物信息学方法和DNA微阵列技术发现的一个与血液胆固醇代谢调节相关的基因,最近的研究表明,PCSK9作为一种分泌性蛋白,除了降解LDLR,调节胆固醇代谢之外,可能还具有其他的一些生物学功能。我们前期研究发现PCSK9在兔动脉粥样硬化斑块以及THP-1源性巨噬细胞中高表达,LDL和ox-LDL都可以上调PCSK9在THP-1源性巨噬细胞中的表达。靶向PCSK9的RNA干扰能有效抑制ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞的凋亡作用,这提示ox-LDL在巨噬细胞中的生物学效应可以被PCSK9所影响。ox-LDL诱导巨噬细胞中炎症因子的表达与分泌是ox-LDL的重要生物学效应之一,研究PCSK9是否也能干预炎症因子的表达与分泌具有重要的科学意义。目的观察PCSK9 siRNA对ox-LDL诱导THP-1源性巨噬细胞分泌炎症因子的影响,为阐明PCSK9在动脉粥样硬化中的作用提供实验依据。材料与方法用不同浓度的ox-LDL (0,10,20,40,80μg/ml)处理经PMA诱导贴壁的THP-1源性巨噬细胞不同时间(0h,6h,12h,24h,48h),RT-PCR、ELISA、Western Blot分别检测炎症因子IL-1α、IL-6、TNF–α以及PCSK9 mRNA和蛋白的表达。应用Lipofectamine2000转染不同浓度的PCSK9 siRNA(20nmol/l,40nmol/l,80nmol/l )进入THP-1源性巨噬细胞24h,筛选出最有效的siRNA浓度,将此浓度siRNA转染THP-1源性巨噬细胞24h后,再加入ox-LDL处理24 h,RT-PCR、ELISA、Western Blot检测炎症因子IL-1α、IL-6、TNF–α表达以及NF-κB核位移。结果随着ox-LDL浓度的不断增加THP-1源性巨噬细胞炎症因子IL-1α、IL-6及TNF–αmRNA和蛋白的表达逐渐增加,同时RT-PCR、Western Blot检测发现PCSK9 mRNA、蛋白表达均增高。PCSK9 siRNA转染THP-1细胞后,再用ox-LDL处理,RT-PCR、ELISA、Western Blot检测发现与ox-LDL单独处理组相比,IL-1α、IL-6、TNF–αmRNA和蛋白表达都降低并且NF-κB核位移减少。结论PCSK9 siRNA能够抑制ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子IL-1α、IL-6和TNF-α表达与分泌,其机制与抑制NF-κB核位移有关,提示PCSK9可能参与了炎症反应的调节。