【摘 要】
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嗜热脂肪芽孢杆菌(IAM11001)能产生三种β-半乳糖苷酶,分别为β-半乳糖苷酶Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ(β--Ga1Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ).其中由bgaB基因编码的β--GalⅠ耐热性最好.该文以bgaB基因为研究对象,
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嗜热脂肪芽孢杆菌(IAM11001)能产生三种β-半乳糖苷酶,分别为β-半乳糖苷酶Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ(β--Ga1Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ).其中由bgaB基因编码的β--GalⅠ耐热性最好.该文以bgaB基因为研究对象,共尝试了三种表达体系.扩增出的bgaB基因连入克隆载体Pblue-Script,确定基因活性和序列之后,再进行基因表达.利用PKK223-3载体在Tac表达体系中表达获得的重组菌中β-半乳糖苷酶的比酶活比出发菌株高出10倍左右.利用PET-20(b)载体在T7表达系统中表达获得的重组菌中β-半乳糖苷酶比酶活比出发菌株高出50倍左右.利用PPIC9K载体在毕赤氏酵母表达体系,获得的重组菌中β-半乳糖苷酶的酶活极低.最后对携带有重组质粒pET-20(b)-bgaB的大肠杆菌工程菌BL21(DE3)进行了表达诱导条件的优化.确定的最适培养基为SOB培养基.
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