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前言膀胱过度活动症（Overactive bladder,OAB）是一种以症状学诊断为基础的新的概念。国际尿控学会2002年将OAB的概念正式定义为一种提示下尿路功能障碍的症状综合征,主要表现为尿急,伴或不伴急迫性尿失禁,通常伴有尿频和夜尿,严重的可因尿不净导致双肾、输尿管积水而形成肾功能损害,从而危及生命。OAB多由逼尿肌的无抑制性收缩所致,其发病率很高,对患者的生理和心理发育均有严重的影响,使生活质量下降。OAB的病因复杂,目前尚不完全清楚,主要与膀胱尿道神经源性、解剖和功能异常有关。目前虽然对OAB的治疗方法很多,但只能缓解症状,不能达到治愈。因此正确的治疗和处理OAB非常必要。P2X受体是近年来新发现的一种嘌呤能ATP受体,它广泛分布于全身各种组织,主要参与平滑肌的舒张与收缩调节,在人类的膀胱感觉和逼尿肌收缩方面起重要作用,但其在OAB的发生、发展过程中具体机制尚不完全清楚。由于很难得到人类OAB的组织标本,故本研究在成功制做OAB大鼠模型的基础上,经尿动力学检查确定诊断,获取OAB大鼠膀胱组织;应用RT-PCR、免疫组化等方法检测P2X1受体在正常大鼠以及OAB大鼠膀胱逼尿肌中的表达,初步探讨P2X1受体在OAB时膀胱舒缩功能调节中的作用及其与膀胱功能障碍的关系,为临床治疗OAB所引起的膀胱功能障碍提供新的理论依据。实验材料一、实验动物雌性Wistar大白鼠32只,3-4个月,250克左右,购自中国医科大学附属盛京医院动物中心。二、实验试剂总RNA分离试剂（tiands,中国天泽基因工程有限公司）;RT-PCR试剂盒,DNA聚合酶（TAKaRa,大连宝生物工程有限公司）;P2X1受体亚型基因mRNA引物为美国Medline国立图书馆基因库检索基因,计算机Primer 5.0版软件自行设计（英俊生物技术有限公司）;一抗P2X1受体抗体（chemicon公司,美国）,免疫组化UltraSensitiveTMSP超敏试剂盒（购自福州迈新生物技术开发有限公司）。三、主要实验仪器设备眼科手术器械;紫外分光光度计（UV-1201型,SHIMAD2u,Japan）;PCR扩增仪（Biotron,Germany）;台式低温高速离心机（5417R,Eppendorf AG,Germany）水平电泳槽及电泳仪均产自中国;自动电泳凝胶成像分析仪（Kodak,1D,USA）;Leica RM2025型石蜡切片机（德国）;Nikon型光学显微镜（Nikon Eclipse E800microscope,Kawasaki,Kanagawa,日本）;医用微波炉（Galantz）。实验方法1、所有32只大鼠经尿动力学检查无异常后,纳入实验研究。分为正常对照组（A组,10只）和模型组（B组,22只）。B组大鼠全部进行动物实验,结扎大鼠膀胱-尿道交界处,造成膀胱出口部分梗阻,再经尿动力学检测,以充盈期逼尿肌出现无抑制性收缩为诊断OAB的标准,根据OAB的有无将B组再分为B2组（膀胱过度活动症组）和B1组（模型对照组）。2、采用RT-PCR、免疫组织化学的方法检测P2X1受体在正常大鼠和OAB大鼠逼尿肌中的表达情况,探讨P2X1受体在OAB膀胱功能调节中的作用及其与膀胱功能障碍的关系。3、所有数据均以（?）±s表示,采用SPSS13.0统计软件进行t检验,P＜0.05表示差异有统计学意义。结果一、动物模型及尿动力学检测结果A组10只大鼠全部存活,无OAB出现,膀胱壁光滑,弹性良好。B组22只大鼠,因尿路感染等原因死亡3只,存活19只。经尿动力学检测,A组膀胱充盈期曲线平滑,无逼尿肌收缩,排尿期逼尿肌反射正常（18.1±4.7cmH2O）;最大膀胱灌注量为0.5ml;B组中52%（10/19）存在OAB（B2组）,表现为膀胱壁增厚,弹性较差。膀胱在充盈期有不规律的无抑制性收缩,逼尿肌收缩时于尿道外口有尿液溢出,单位时向内非抑制性收缩的发生频率为（2.9±1.2次/min）,排尿期未见明显的逼尿肌反射;B组中47%（9/19）无OAB（B1组）,表现为膀胱壁光滑,弹性良好。膀胱于充盈期未见明显的逼尿肌收缩及溢尿现象。二、RT-PCR结果A组、B1组及B2组的膀胱逼尿肌中均有P2X1受体mRNA的表达,其相对表达量分别为（1.805±0.102）、（1.821±0.068）和（1.968±0.063）。P2X1受体mRNA在B2组大鼠膀胱逼尿肌中的表达较A、B1组高,具有统计学意义（P＜0.01）。B1组P2X1受体mRNA较A组表达无明显差异,无统计学意义（P=0.737）三、免疫组织化学结果A组、B1组及B2组中膀胱逼尿肌细胞的胞浆中均有P2X1受体的表达,B2组与A组、B1组相比,膀胱粘膜增厚,肌纤维增粗,肌丝紊乱,其膀胱逼尿肌中免疫阳性颗粒呈现深染,较A组、B1组数量明显增多。A组、B1组膀胱逼尿肌中黄褐色免疫阳性颗粒数量较少,颜色较浅,二者无明显差异。结论1、大鼠的下尿路梗阻,可引起膀胱的神经和功能性损害继而出现OAB,因此可确认下尿路梗阻是引起逼尿肌不稳定的重要因素。2、OAB大鼠逼尿肌中P2X1受体表达较正常大鼠增高,提示P2X1受体可能对OAB时膀胱舒缩功能障碍的发病机制起重要作用;这种增高可能与膀胱功能受损密切相关。