论文部分内容阅读
目的：研究正安野木瓜抗菌活性作用,优化抗菌粗提物提取工艺,分离纯化抗菌活性物质及鉴定结构。方法：本实验以正安野木瓜果实为主要原材料,以牛津杯法检测测试物抗菌活性。(1)鉴定正安野木瓜果实和叶片PBS浸提物对7种致病菌的抑菌作用。(2)以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、60%乙醇、95%乙醇和ddH2O等七种不同极性的溶剂为提取溶剂,研究溶剂因素对野木瓜果实抗菌粗提物提取率的影响。以60%乙醇为提取溶剂,单因素试验和正交试验考察液料比、温度及提取时间对野木瓜果实抗菌粗提物提取率的影响,确定合适的提取工艺。(3)研究不同溶剂对野木瓜果实粗提物抗菌活性的影响。(4)二倍稀释法和牛津杯法研究野木瓜果实60%乙醇粗提物(ethanol crude extract, ECE)抗菌性能及其稳定性。(5)采用含药的RL-J培养基测定方法,检测ECE抗结核杆菌活性。(6)采用活性跟踪法、萃取和硅胶柱层析技术对ECE中的抗菌活性物质进行分离纯化。从乙醚萃取物中分离得到抗菌活性组分Ⅱ②-1,采用气相-质谱联用技术分析和初步鉴定组分Ⅱ②-1中所含的化合物及其结构。结果：1,正安野木瓜果实PBS浸提物对七种测试菌具有较好的抗菌活性,而叶片无活性。2,60%乙醇作为提取溶剂时,野木瓜果实抗菌粗提物提取率最高。液料比和温度对野木瓜果实抗菌粗提物提取率的影响较大；60%乙醇为提取溶剂时的最佳工艺为：液料比2.5：1,浸提温度70℃,时间2h。在该条件下,提取率为8.49%。3,ddH2O、60%乙醇、95%乙醇、丙酮和乙酸乙酯五种提取物浓度在100mg／ml时对试验细菌均有抑菌活性,而氯仿和石油醚提取物无活性。七种溶剂提取物在100mg/ml时对新生隐球菌均无抑菌作用。4,ECE对金黄色葡萄球菌、伤寒沙门氏菌、大肠杆菌、乙型副伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌都有很好的抑菌作用,其最低杀菌浓度(MBC)分别为25mg/ml、25mg/ml、50mg/ml、50mg/ml、2.5mg/ml和>200mg/ml,最低抑菌浓度(MIC)分别为25mg/ml、25mg/ml、25mg/ml、25mg/ml、12.5mg/ml和25mg/ml。同时50mg/ml和25mg/ml ECE对结核杆菌H37Rv具有抑制生长作用。5,ECE的抗菌作用随浓度降低而减弱,其浓度的自然对数与抑菌圈面积呈现良好的线性关系,符合典型的抗生素作用方程。6,ECE经100℃加热60min和121℃处理30min,其抗菌作用几乎没有受到影响,同时低温保存对其抗菌活性也无影响。7,从乙醚萃取物中分离纯化出具有抗菌活性组分Ⅱ②-1,它的主要成分为邻苯二甲酸二异辛酯,纯度为95.389%。100mg/ml Ⅱ②-1溶液对金黄色葡萄球菌、伤寒沙门氏菌、大肠杆菌、乙型副伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌和阴沟杆菌有显著的抑菌作用,其抑菌圈直径在18.0-29.0mm之间。结论：(1)正安野木瓜果实对常见致病菌有抗菌活性,其60%乙醇提取物(ECE)抗菌谱广,抗菌活性强,且热稳定性好。提示正安野木瓜是一种可开发为抗菌药物的资源。(2)ECE中含有抗菌化合物邻苯二甲酸二异辛酯。(3)提取温度、液料比和提取时间是影响抗菌粗提物提取率的主要因素。