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目的:临床研究肝移植术后补充维生素D预防病人发生急性排斥反应和感染的作用,以及维生素D诱导Treg细胞的分化及其分子机制。为肝移植病人术后常规服用维生素D提供理论基础。方法第一部分回顾性队列研究分析移植病人术前维生素D严重缺乏的风险因素;单因素及多因素COX回顾分析维生素D缺乏、维生素D补充以及各T细胞亚群分化比例与肝移植术后急性排斥反应之间的关系;混合效应线性模型分析重复测量资料T细胞亚群和补体C3在术前,术后不同时间的变化。生存分析研究维生素D补充对于肝移植术后病人生存率的影响。第二部分流式细胞仪分析1,25(OH)2D3对于Treg细胞和Th17细胞分化的诱导作用,Western Blot及QPCR分析1,25(OH)2D3对细胞因子TGF-β1和IL-17分泌的影响。Elisa分析1,25(OH)2D3存在情况下活化的Jurkat细胞培养液中TGF-β1的分泌浓度变化。第三部分蛋白和转录水平上分析1,25(OH)2D3对于蛋白VDR、PLC-γ1和TGF-β1表达的影响作用。采用Jurkat E6-1缺陷型细胞Jurkat gamma 1细胞作为对照,分析PLC-γ1不表达情况下TGF-β1表达水平。慢病毒转染过表达Jurkat E6-1中PLC-γ1蛋白,研究TGF-β1表达变化。综合分析1,25(OH)2D3诱导Treg细胞分化的信号通路。结果第一部分女性,肿瘤和酗酒的病人更容易发生维生素D重度缺乏。维生素D重度缺乏患者较维生素D轻到中度缺乏患者在术后一个月之内更容易发生急性排斥反应和感染。维生素D补充可以有效减少急性排斥反应和感染的发生。维生素D补充组的病人术后血中T memory细胞和Treg细胞比例上升同时补体C浓度降低。第二部分1,25(OH)2D3诱导CD4+T细胞分化成Treg细胞同时抑制Th17细胞的分化。同时,1,25(OH)2D3促进TGF-β1分泌,抑制促炎症因子IL-17A的分泌。第三部分1,25(OH)2D3促进活化的CD4+T淋巴细胞表达PLC-γ1。PLC-γ1表达增加可以促进TGF-β1表达。1,25(OH)2D3诱导Treg细胞分化通过调控VDR/PLC-γ1/TGF-β1/信号通路。结论1.维生素D补充可以预防维生素D缺乏病人肝移植术后急性排斥反应感染的发生,并可以诱导T memory细胞和Treg细胞比例上升。2.维生素D诱导Treg细胞的分化同时抑制Th17细胞分化,并且诱导TGF-β1分泌增多,同时抑制IL-17A分泌。3.维生素D诱导Treg细胞的分化通过调控VDR/PLC-γ1/TGF-β1/信号通路。