为了开发适用于犊牛的乳酸菌制剂,明确乳酸菌对犊牛的益生作用,本研究采用犊牛肠道黏膜和食糜为菌源,分离筛选出具有抗肠道逆环境强和抑菌特性优良的乳酸菌,同时探讨该乳酸菌对犊牛体重、直肠粪便菌群和腹泻的影响,为乳酸菌在犊牛生产中的应用提供理论依据。从15日龄健康犊牛的不同肠道(十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠)黏膜和食糜分离筛选得到31株革兰氏阳性、无芽孢乳酸菌。应用体外模拟法在pH=2条件下处理2h后,以存活率在5%以上为标准,选定9株菌进行耐胆盐和耐胃蛋白酶的筛选。最终得到4株乳酸菌M5、M7、SB1和Z4,在pH=2条件下处理2h后的存活率分别为39.24%、28.08%、44.20%、23.28%;在胆盐浓度0.1%条件下处理2 h后的存活率分别为44.17%、70.13%、32.92%和29.86%,有较强的耐牛胆盐能力;经人工胃液处理后各菌的存活率均可达到30%以上,能抵御体外模拟的胃肠道逆环境的影响。4株乳酸菌对大肠杆菌的抑制作用明显,抑菌圈直径为16mm~21mm,其中M7对埃希氏大肠杆菌和致病性大肠杆菌的抑菌直径均最小。经传统的碳水化合物发酵方法鉴定这4株乳酸菌,初步得出M5为黏液乳杆菌(L.mucosae),M7为鼠乳杆菌(L.murinus),SB1为肠球菌(E.hirae),Z4为盲肠肠球菌(E.cecorum)。通过产酸试验显示,菌株Z4、SB1和M5培养液pH值由培养初始时的6.25,分别下降至pH相对稳定时的4.52、4.56、4.56。经生长试验测定,M5的世代时间最短,为89.8 min,液体培养10h活菌数可达到1.0×1010个/mL。综合各评定因素,选取M5作为用于犊牛生产的益生菌菌种。选用体重相近、健康状况良好的初生荷斯坦母犊牛10头,分成对照组和试验组,每组5头。2组犊牛体重经统计分析差异不显著(p>0.05)。试验期为30天。犊牛出生1~4天饲喂初乳,之后饲喂代乳粉。试验组将乳酸菌液添加在初乳或代乳粉中,添加量为5×108个活菌/kg体重。从生后第一天开始,以饮奶方式连续饲喂乳酸菌,至30d试验结束,试验测定乳酸菌对犊牛体重、直肠粪便菌群和腹泻率的影响。结果表明,试验结束时试验组和对照组犊牛体重分别为47.9kg和46.4kg,差异不显著(p>0.05),但试验组整体生长情况要优于对照组,两者平均体重相差1.5kg;与对照组相比较,饲喂乳酸菌能迅速增加10日龄犊牛粪便中乳酸菌数量(p>0.05),到30日龄时试验组乳酸菌数量高于对照组,且差异显著(p<0.05);与对照组相比,饲喂乳酸菌能有效降低10日龄犊牛粪便中大肠杆菌数量(p<0.05),且试验组乳酸菌数量与1日龄相比呈降低趋势,而对照组呈上升趋势,至20日龄时,这种变化趋势2组均不明显,但试验组大肠杆菌数量仍低于对照组(p>0.05);试验全期,试验组与对照组犊牛均出现腹泻,但腹泻程度有一定差别,对照组腹泻率高出试验组,尤其是在1~10日龄期间(腹泻率分别为8%和2%)。