减蛋综合征病毒(Egg Drop Syndrome Virus,EDSV)属于禽腺病毒Ⅲ型,能够使蛋鸡产软壳、薄壳、无壳蛋,产蛋率严重下降,造成严重的经济损失。本病可使鸡产蛋率下降20%~30%,蛋的破损率达30%~40%,被列为世界上危害养鸡业最严重的四大病毒性传染病之一。1976年Van Eck首先报道了本病在荷兰发生,1977年分离到EDS病毒。自1991年以来,在中国从北向南,从东到西迅速传播,广泛流行。在中国,1991年首次从南京某鸡场分离到鸡源EDS病毒,命名为NE4株,1992年从一群产蛋减少的鸭群中分离出鸭源EDS病毒,命名为JE1株。鸭被普遍认为是该病原的宿主之一,EDSV对鸭并不存在致病性,但是自从Bartha等1984年首次从产蛋下降的鸭群中分离到该病毒以来,越来越多的关于EDSV对鸭的研究在国内外开展起来。近年来,国内外的研究表明:在一定的条件下,鸭感染EDS-76病毒后可以使鸭发病并引起严重的产蛋下降。因此加强对该病的研究,有利于保护和促进我国养禽业的发展。本研究选用62只62周龄健康种鸭,随机分为两组,每组31只。其中10只用来观察产蛋量变化,21只用来采集试验所需材料。利用分离的鸡源减蛋综合征病毒SD01株通过口腔接种途径人工感染62周龄种鸭,每只接种1.5 mL 10-3.6EID50/0.2 mL尿囊液,观察试验种鸭的发病情况及临床症状,在感染后不同时间剖杀,观察各组织器官的主要剖检变化,收集组织和棉拭子用于测定试验鸭的器官载毒量和排毒情况。采集血清检测抗体滴度和IL-4,IFN-γ的变化。按常规方法制备内脏器官石蜡切片、HE染色,观察各器官的显微病变。结果显示,试验鸭感染EDSV后出现轻微的呼吸道症状。攻毒组的IL-4、IFN-γ水平明显高于对照组;病理组织学变化表现为大脑、肾脏、脾脏、肺脏、卵泡等器官内出血以及淋巴细胞浸润,输卵管水肿、肝细胞肿胀。选择高度保守的六邻体蛋白基因设计一对扩增引物和一条MGB探针。将回收PCR产物克隆到pMD18-T载体上、转化,重组质粒,将筛选的阳性质粒10倍梯度倍比稀释,作为构建Taqman-MGB荧光定量PCR标准曲线的模板。结果表明,建立的Taqman-MGB荧光定量PCR检测方法敏感度高,最少能检测到10 Copies/μL的模板,标准曲线的相关系数较高,R2值均在0.99以上;特异性检测结果表明,除EDSV有扩增曲线外,其它病毒无扩增曲线产生,说明该方法能特异性的检测EDSV;重复性检测结果表明,批内、批间的变异系数均不大于1.5%。上述试验结果表明,建立的Taqman-MGB荧光定量PCR方法具有较高的特异性、稳定性、灵敏性,适用于临床上EDSV早期快速检测。应用已建立的Taqman-MGB荧光定量PCR方法对攻毒后3、7、14、21、28、35 d种鸭不同组织内的病毒载量以及棉拭子内的载毒量进行检测。结果表明,随着攻毒天数的增长不同组织病毒载量也在不停变化。攻毒后在各组织中均能检测到病毒存在;其中肝脏、输卵管的病毒含量明显高于其他内脏器官,气管、肠道中病毒含量最低。