低氧培养下小胶质细胞功能状态研究

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目的:小胶质细胞在脑缺血缺氧等中枢神经系统病变中发挥着既保护又损伤的“双刃剑”作用。不同损伤刺激条件下,其功能状态不同,造成这种变化的机制目前不清。故本研究目的旨在探讨不同低氧刺激条件下小胶质细胞功能状态变化及引起这种变化的可能机制。方法:以小鼠小胶质细胞瘤BV2细胞株和大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞株为研究对象,分别用其来代表小胶质细胞和神经元。低氧条件下培养BV2细胞,用其培养液培养PC12细胞,通过CCK-8法测定PC12细胞存活率并以此来评价BV2细胞功能;同时应用ELISA法检测BV2细胞在不同功能状态下分泌表达TNF-α、IL-1β、NGF情况。本研究中,PC12细胞被分为5组,即:低氧1h组、低氧4h组、低氧12h组、损伤对照组及正常对照组。正常对照组为仅用新鲜DMEM培养基培养的PC12细胞组;损伤对照组为用过氧化氢和DMEM培养基培养的PC12细胞组;低氧1h、4h、12h组分别是指用过氧化氢和低氧培养1h、4h、12h的BV2细胞培养液培养的PC12细胞组结果:1.BV2细胞在低氧培养下形态发生变化,随着低氧时间延长,细胞逐渐变圆,突起逐渐消失。2.正常对照组PC12细胞存活率如按100%来计算,则在低氧1h、4h、12h组及损伤对照组PC12细胞存活率分别为75.88%、51.09%、11.16%和55.58%。与损伤对照组相比,低氧1h组PC12细胞存活率明显提高(p<0.01),低氧12h组PC12细胞存活率明显下降(p<0.01),低氧4h组PC 12细胞存活率虽有下降但无统计学意义(p>0.05)。3.BV2细胞低氧培养1h,其分泌的TNF-α、IL-1β、NGF分别为369.35±7.41pg/ml、199.49±17.11 pg/ml、4.33±0.77pg/ml;当低氧培养时间延长到4h时,上述这些细胞因子水平分别增加到406.97±7.73pg/ml、289.13±15.25pg/ml、37.82±1.17pg/ml;随着低氧培养时间继续延长到12h,TNF-α和IL-1β水平进一步增加到474.88±19.07pg/ml和386.63±21.62pg/ml,而NGF的水平则下降到18.08±1.60pg/ml。结论:1.小胶质细胞在低氧刺激下形态、功能发生变化,短时间低氧刺激表现出保护作用,长时间低氧刺激则表现为损伤作用。2.小胶质细胞功能变化可能与其分泌表达的TNF-αIL-1β、NGF有关。
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