论文部分内容阅读
卵母细胞是高度分化的细胞，它的发育和调控始终是发育生物学中最有吸引力的研究领域。H2af1o(H2A histone family，member1，oocyte-specific)是一个首先在银鲫中鉴定出来的新的组蛋白H2A变体(Wu et al.，2009)。本研究通过揭示H2af1o在斑马鱼中的同源基因的分子特征和表达模式，以及其蛋白动力学特性，试图找出H2af1o在斑马鱼卵母细胞成熟和胚胎发育中的具体作用机制。 在本研究中，我们首先扩增出H2af1o在斑马鱼中的同源基因，命名为斑马鱼H2af1o。通过对该基因在斑马鱼卵母细胞成熟以及胚胎发育早期的分子表达模式的研究，我们发现斑马鱼H2af1o在mRNA水平以及蛋白水平都是母源的。另外，核小体体外重组实验显示斑马鱼H2af1o可以成功的组装进核小体。接下来，我们采用分析超速离心的方法分析了包含H2af1o的体外重组核小体在不同盐离子浓度下的沉降系数变化，结果发现在核小体中H2af1o相对于常规H2A结构较为松散。斑马鱼胚胎体内实验证明H2af1o在细胞有丝分裂中与细胞核DNA相结合。我们还发现H2af1o的核定位信号位于N端尾巴。斑马鱼H2af1o的C端尾巴在有丝分裂中主要与染色体DNA结合有关。最后，通过对H2af1o cDNA的5侧翼序列进行荧光素酶活性分析发现+56/-115序列区域是其启动子的核心区域。我们的研究结果表明作为银鲫H2af1o在斑马鱼中的同源基因，斑马鱼H2af1o具有相对保守的生物学功能，其在核小体中较为开放的空间结构为替换常规H2A提供了更大的机会。斑马鱼H2af1o包含核定位信号的N端为其入核提供了保障，而C端则保证了其核小体的稳定性。